Polishing (高度精製)
目的
- 一般的な高度精製は、陰イオンと陽イオン交換クロマトグラフィで行われる
- それでも十分な精製度が得られない場合、疏水やマルチモーダルの担体が用いられる
- 基本的なレジンとその条件設定が確定できれば、レジンの粒径を小さくすることで、ピークの分離は向上する
考慮事項
- 抗体の場合は、プラットフォーム精製が存在する
- Protein A (Binding/Elution)
- AEX (Flow-through )
- CEX (Binding/Elution)
- Virus Filtration
- UF/DF (バッファ交換/濃縮)
- 添加剤添加
- 分注保管
- 研究初期段階で、抗体以外のレアなタンパク質の精製の場合
- AECまたはCEXでCapturing工程として精製する
- その場合、バッファ交換が必要ない条件設定を構築した方が良い。以後の追加精製が楽になる
- Conductivityは、容易に低くすることができないため、低いconductivityで回収できれば、続く精製工程の手間が省略できる
- 後のpH調整で簡単に調整可能であり、pH調整によるconductivityの変化は少ないため、pHは問わない。
- リン酸を含まないバッファで回収できれば、Polishingに使用するハイドロキシアパタイトでの精製に使える
- Polishingのクロマトは、ハイドロキシアパタイトが推奨できる。
- pHは5.5以上(でないと、レジンが溶ける)
- アルカリ側は、Resinは安定
- リン酸を含まない、あるいは、低い(~5mM)でないと吸着できないタンパク質もある。前工程で緩衝液の組成は、この工程に備えて考慮しておく
- NaCl濃度で溶出されるタンパク質やリン酸で溶出されるタンパク質など、マルチモーダルな条件設定が可能
- Endotoxinは、分子が色々あるため、パス画分にも、溶出画分にも現れる
- 精製戦略としては、パス画分に目的タンパク質をパスさせないこと、目的タンパク質が溶出する直前の洗浄条件を求めること、目的タンパク質が溶出できる最小条件を求めること、である。
GE Healthcare HiPrep™ IEX FF 16/10 Columns, Fisher Scientific –
https://www.fishersci.fi/shop/products/ge-healthcare-hiprep-iex-ff-16-10-columns-2/10607855
関連記事(タンパク質質精製)
Post Views: 236 遺伝子導入装置 バイオ医薬品の目的タンパク質をコードする遺伝子を産生細胞株に注入する装置。その操作の後、導入できた細胞のセレクション → クローニングへと進む。 MaxCyte ExPER…
Post Views: 264 AKTA Ready System Flow Kitというシングルユースの配管キットを装置する方式のクロマト装置である。配管の洗浄が必要なく、バイオロジクスのCMOでは汎用されている。 ク…
Post Views: 166 処理目的 得られたサンプルは、in vitro, in vivo試験で評価するために、除菌ろ過を行い、無菌状態にする 考慮事項 膜面積 サンプルの状態 (プレフィルターの必要性) 処理時の…
Post Views: 164 UF/DF工程 目的物資の安定な電気伝導度とpHに組成を変更することを目的とします。 ラボシステムとして、Sartorius StedimのVIVA FLOW 200を以下に示します。 F…
Post Views: 177 Polishing (高度精製) 目的 一般的な高度精製は、陰イオンと陽イオン交換クロマトグラフィで行われる それでも十分な精製度が得られない場合、疏水やマルチモーダルの担体が用いられる …
Post Views: 167 Bio-Process Low pH Virus Inactivation Process 低pH処理によるウイルス不活化は、pHの調整後は静的な保管条件が維持されるため、基本的にはプロセ…
ランダム表示(Bio)
Post Views: 221 ID20838 Voyager Therapeutics NASDAQ: VYGR, US、サイトVoyager Therapeutics, Inc. is clinical-stage …
Post Views: 201 WHOがCOVID-19治療薬の臨床を開始 4つの薬剤について大規模な臨床試験を開始。 WHO launches global megatrial of the four most pro…
Post Views: 227 BiTE抗体とは 二重特異性抗体(BiTE)は、がん細胞と免疫細胞を引き合わせる。近寄った免疫細胞は、がん細胞を攻撃できるようになる。抗体は2つのそれぞれ異なる特異抗原と結合する「手」を持…
Post Views: 188 nucleotide ; ヌクレオシドにリン酸基が結合した物質。ヌクレオシドは五単糖の1位にプリン塩基またはピリミジン塩基がグリコシド結合したもの。 関連記事: [Bio-Edu] 遺伝子…
Post Views: 195 ID12516 MolMed イタリア ウイルス・ベクターを用いた遺伝子治療薬製造のCDMO サービス MolMed独自のテクノロジーを持っている。 MolMedは、ベクター製造用の独自の…
Post Views: 211 Antibody Societyサイトの紹介 抗体医薬の承認数は増加するばかりです。バイオシミラー(Biosimilar)以外の新薬に関する承認済みやレビュー中のリストは、「Antibod…
関連記事:
[Bio-Process] Low pH Virus Inactivation ID8305
[Bio-Process] 除菌ろ過 (Sterile filtration) [2020/02/01] ID8318
[Bio-Lab] マニュアル式のラボスケール・カラムクロマトで蛋白質精製の条件を検討する – ID3106 [工事中] ID3106
[Bio-Process] ハーベスト工程・培養上清の回収 [2020/02/01] ID8290
[Bio-Process] UF/DF Process [2020/09/30] ID8315
[Bio-Raw Material] Protein A resinの簡単な説明 [2020/06/01] ID18411
[Bio-Edu] 血漿由来の抗体精製 – Poll AcroSep resin), 2009 – ID14 [2019/08/12] ID14
[Data Link] Purification of rAAV-1 and -9 with ultracentrifugation-free technique towards GMP production.(2013-2015, 科研費研究) – ID2225 [2019/09/15] ID2225
[Bio-Process] Affinity & Polishing chromatography – 抗体の精製 [2021/10/30] ID8453
[Bio-FAQ] タンパク質精製用のLab(実験室)の準備について教えてください[2022/11/16] ID41334