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rAAV vectorの精製方法
| Standard purification | Optimized purification |
| Transfection | Transfection |
 | |
|
Centrifugation (Cell Pellet by 2,500g x 10min) | Same as left |
| |
| Freeze-thaw Lysis (50mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 2mM MgCl2, pH8.0) | Same as left |
| |
| cfg (2,500g x 10min) | Same sa left |
| |
| cfg-sup | cfg-sup + culture supernatant |
| |
| 8% PEG, 0,5M NaCl by adding 40% PEG 8000, 2.5M NaCl, 2h on ice |
| |
| cfg (2,500g x 30min) |
| |
| cfg-ppt |
| |
|
Resuspend (50mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 2mM MgCl2, pH8.0) |
| |
| DNase Treatment (100U/mL, 1h, 37’c) | Same as left |
| |
| Ultracentrifugation (104,000g x 24h, 20’c) | Same as left |
| |
| Dialysis vs PBS (overnight) | Same as left |
| |
| Ultracentrifugation (182,000g x 24h, 20’c) | Same as left |
精製手順
Culture -> Cell -> Lysate -> Clarification -> Polyethylene Glycol (PEG) 8000 -> Ultracentrifugation
注) UltracentrifugationをGradientと業界では読んでいる
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用語の解説、関連タグ付き投稿の抽出
PEG
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