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AAV BIOLOGICS education production

[rAAV] rAAVの従来からの精製方法 (PEG沈殿、超遠心), 2010 – ID2417 [2019/09/26]

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rAAV vectorの精製方法

Standard purificationOptimized purification
TransfectionTransfection

Centrifugation (Cell Pellet by 2,500g x 10min)

Same as left
Freeze-thaw Lysis (50mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 2mM MgCl2, pH8.0)Same as left
cfg (2,500g x 10min)Same sa left
cfg-supcfg-sup + culture supernatant
8% PEG, 0,5M NaCl by adding 40% PEG 8000, 2.5M NaCl, 2h on ice    
cfg (2,500g x 30min)
cfg-ppt

Resuspend

(50mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 2mM MgCl2, pH8.0)

DNase Treatment (100U/mL, 1h, 37’c)Same as left
Ultracentrifugation (104,000g x 24h, 20’c)Same as left
Dialysis vs PBS (overnight)Same as left
Ultracentrifugation (182,000g x 24h, 20’c)Same as left

精製手順

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Culture -> Cell -> Lysate -> Clarification -> Polyethylene Glycol (PEG) 8000 -> Ultracentrifugation

注) UltracentrifugationをGradientと業界では読んでいる

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High AAV vector purity results in serotype- and tissue-independent enhancement of transduction efficiency

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PEG

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Update ID21920

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