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[Bio-Process] Affinity & Polishing chromatography – ID8453 [2020/02/02]

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Bio-Process-Chromatography

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タンパク質精製の基本であるクロマトグラフィーには、以下のモードがある。

抗体の精製では、長い歴史があり精製プラットフォームが完成しているため、使用するカラムの種類とその順序は検討する必要はない。それぞれのクロマトの条件についても、検討範囲はある程度狭く限定するとが可能である。

  • Affinity chromatography
  • IEX (Ion Exchange Chromatography)
    • Anion Exchange Chromatography
    • Cation Exchange Chromatography
  • HIC (Hydrophobic Interaction Chromatography)
    • Phenyl
    • Butyl
  • HA (Hydroxyapatite)

Protein A Column

抗体を産生株した培養液は、清澄ろ過してから、Protein AカラムによるBinding/Elutionモードで抗体のアフィニティ精製を行う。

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注意しなければならないこと

  • 電気泳動では、抗体の染色バンドのみが確認できるので、精製度は高いと思われがちであるが注意が必要
  • HCPHCDは多量に含まれている。そのような理由から、精製とは呼びにくく、キャプチャリング(capturing)工程と呼ばれる
  • 次工程として、少なくとも、ハイドロキシアパタイトやAEXを実施すべきである。

AAV (rAAV)の精製においても、抗体の精製プラットフォームに従うように、レジンの開発が勧められており、Affinity resinの市販品も既に存在する。

  • Anti AAV antibody
    • Cytiva製
    • ThermoFisher製

Mobius® FlexReady Solutions

https://www.merckmillipore.com/JP/ja/Mobius-Single-Use-Manufacturing/Mobius-FlexReady-Solutions/EcGb.qB.e04AAAFZUuNiYtcV,nav

Single-use for Downstream, GE Healthcare –

https://www.gelifesciences.com/en/us/solutions/bioprocessing/products-and-solutions/downstream-bioprocessing/single-use-for-downstream
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