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[rAAV-Edu] rAAV9の精製方法 – 特許,2018 – ID2559 [2019/10/05]

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rAAV9 vectorの精製方法

培養液のバッファ組成をTFF処理で調整、硫安(AmSo4)沈殿処理と第4級アンモニウム陰イオン交換クロマトグラフィー(HiPrep Q XL)によるFlow through mode、最後にSECによる精製でrAAV9を得る

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  • Transfection by 3 plasmid (with PEI, FBS-free)
  • Post culture
  • Harvest supernatant
  • TFF process
  • 1/3 sut. concentration AmSO4 precipitation
  • centrifuge
    • to take the sup.
  • 1/2 sut. concentration AmSO4 precipitation
  • centrifuge
    • to take the sup.
  • Dilution to 7.3 mS/cm
  • AEX
    • HiPress Q XL 16/10 column chromatograph with flow through mode
  • TFF process
    • 30kDa
  • SEC column chromatography
    • HiLoad 16/60 Superdex 200, MNH pH6.5, 300mM NaCl, 0.01% F-68

Highly Efficient Ultracentrifugation-free
Chromatographic Purification of Recombinant
AAV Serotype 9

https://www.cell.com/molecular-therapy-family/methods/pdfExtended/S2329-0501(18)30111-6

Improved methods for purification of recombinant aav vectors, EP2443233A1, 2009

https://patents.google.com/patent/EP2443233A1/en
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