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気になる企業 – Charles River – ID14016 [2021/01/21]
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Charles River

チャールスリバーはCROです．医薬品の研究開発のあらゆる段階のサポートをしてくれます．バイオロジクスでは，20,000以上の試験報告書の実績と200以上の承認された製品のサポートした実績がありますsource．

Charles Riverの他に，バイオロジクスでは欠かせないウイルスクリアランス・スタディを受けてくれる会社には，WuXi，BioRelianceなどがあります．
- サイト(officeを含む)
  - US
  - UK
  - Ireland
  - France
  - Spain
  - Germany
  - Denmark
  - Beijing
  - Shanghai
サービス

Charles river Corporate site
https://www.criver.com/?_ga=2.121116552.1298269015.1611214384-2008491346.1611214384
- 動物モデル (Animal Model)
  - MICE
  - RATS
  - HAMSTERS
  - GUINEA PIGS
  - RABBITS
  - GERBILS
  - 動物モデルの診断項目
- 発生学(Embryology)
- 健康観察 (Health Monitoring)
- 遺伝子解析(Genetic Testing Services)
- 専門家によるサービス(Scientific Staffing, in-sourcing)
編集履歴
```
2021/01/21 Mr.HARIKIRI
```
2020年4月22日
気になる企業 – BioMarin – 世界の開発競争を尻目に、難しいとされいた血友病Aに対する遺伝治療薬をAAV5で開発 – BLAリジェクト、P3追跡データ2年を求められる – [2020/09/02]
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ID12872

BioMarin

血友病Aに対する遺伝子治療薬が現実なもにとして世の中に出ます。待ち望まれた患者さんは多くいらっしゃると思います。遺伝子サイズが大きいことから、世界の大手医薬品メーカーすら開発を見送っていた血友病Aです。#バイオテクノロジー．画期的です。素晴らしいです。偉業を達成したのは、ニッチ領域のオーファンドラッグを手掛けている小さなバイオテクノロジー企業、Biomarin Pharmaceuticalです。

P1/2の4年のデータで製造承認申請(BLA)を申請していましたが、2020/08/12のBioMarinの発表ですsource。FDAはBLAを許可しませんでした。追跡データとしてP3終了後の2年間のフォローアップ・データを求めました(~2021/11)。今後、販売開始については更に先になります。

BioMarin Pharmaceutical Incは、1997年に設立されたバイオテクノロジー企業。市場に7つの製品があり、多国籍組織が整備されている。アンメッドニーズを持つ患者に革新的な治療法を提供している。

Financial Report (BioMarin site)
1. 2019 : 売り上げ $1700m(1700億円)
```
編集履歴
ID 12872
2020/04/04 はりきり(Mr)
2020/06/12 追記 (FVIIIについて)
2020/06/20 追記 (販売開始の許可、4年間の臨床データ、競合他社:Roche(中外製薬、Spark)、Pfizer(Sangamo) )
2020/09/10 追記 (BMN-270の開発概要)
```
- CIO : Hank Fuchs
- カリフォルニア州ノヴァト
- 社員 3000人
- 2017年に業界最大の遺伝子治療薬製造工場を拡張建設し遺伝子治療用の素晴らしいGMP製造所になっています。
investing.com – より
https://www.investing.com/search/?q=biomarin

血友病A-遺伝子治療薬

BioMarin Pharmaceutical Inc.（ナスダック：BMRN）は2020/02/20、米国食品医薬品局（FDA）が優先審査の生物製剤ライセンス申請（BLA）を承認したことを発表しました。しかし、08/19のBioMarinの発表では、FDAカラの審査完了の通知は受けたものの、更に2年間の追跡データの取得を求められたことで、このライセンスの許可は、2年先の2021/11以降になる見込みとなった。
- 血友病Aの成人向けの調査用AAV5遺伝子治療
  (成人で治療効果と予後を見ながら、今後拡大されていくと思われる)
- Valoctocogene Roxaparvovec (BMN 270) for Hemophilia A
- 抗体保有率が低いAAV5を選択
- FDAによるこの承認は、米国であらゆるタイプの血友病の遺伝子治療製品として受け入れられた最初のマーケティングアプリケーション
- 3年間のClinical Phase 1/2とPhase 3の中間段階での分析 (2020/06現在の最新)
- その他情報
  - FDAによるBreakthrough Therapy指定
  - FDA, EMAからのオーファンドラッグ指定
Table 1. Summary of BMN-270 development

Code No. BMN-270
Target Hemophilia A
Vector AAV5
Promoter
GOI
Production Cell Sf9, source(1)
Competitor (1) SB-525 by Sangamo/Pfizer
(2) SPK-8011 by Roche-Spark

Valoctocogene Roxaparvovec – BioMarin – より
https://www.biomarin.com/products/pipeline/bmn-270/

BMN-270とは

ネットで調査しても、BMN-270がどのような薬剤なのかその詳細がよく掴めていませんが、以下、BMN-270について推測してみます。

血友病Aは、血液凝固因子VIII (FVIII)の機能不全により止血が難しくなっている遺伝子疾患です。日本止血学科から、FVIIIの分子量は300kDaです。下記の参考文献には、プレ体が250kDaです。更に成熟型は、細胞内で200kDa (7kb)になります。この分子量でもAAV(4.9kb)に封入ができません。

そこで、活性型のとしてA1-A2のHeavy ChainとA3-C1-C2のLight Chainを別々にAAVへ封入させる戦略もありますが、シンプルにBドメインを削除した(BDD)をGOIとしている様ですsource(1)。

BMB-270 construct

血液凝固因子VIIIのドメイン
日本止血学科

FVIII

血液凝固因子第VIII因子の構造
Light Chain of Factor VIII Is Sufficient for Accelerating Cleavage of von Willebrand Factor by ADAMTS13 Metalloprotease
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC23069/

参考文献 – AAVは5.2kB以下のゲノムしか封入できないが戦略はある
Expressing Transgenes That Exceed the Packaging Capacity of Adeno-Associated Virus Capsids
Hum Gene Ther Methods. 2016 Feb 1; 27(1): 1–12. Published online 2016 Jan 11. doi: 10.1089/hgtb.2015.140PMCID: PMC4761816PMID: 26757051
Kyle Chamberlain, Jalish Mahmud Riyad, and Thomas Weber^*

1990の文献には、FVIIIのA1,A2ドメインをAAVに封入し、A3, C1,C2ドメインを別のAAVに封入する研究があります。
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC23069/

Valoctocogene Roxaparvovecの臨床投与量

血友病Aの遺伝子治療薬Valoctocogene Roxaparvovec (BMN 270, Valrox)の臨床投与量は、低用量2e12 vg/kg, 高用量4e13 ~ 6e13 vg/kgでした。高容量では、その後の3年間および4年間のコホートで出血制御がうまくいっていると述べています。

Valroxを投与すると12週後からFVIII活性は正常域に上がって来ています(正常域範囲: 50 IU/dL~150 IU/dL)。その後2年間で正常範囲を維持できています^{source(Evauate Vantage)}。しかし、その後の臨床観察匂いで、依然としてFVIIIの活性は下がり続けています。

Source: Leerink note May 2, 2019

Source: Biomarin presentation

Table 1: ABR prior to and following treatment with valoctocogene roxaparvovec in BioMarin’s Phase 1/2 study, as presented at the WFH Virtual Summit 2020. (BioMarin)

https://mma.prnewswire.com/media/1192101/BioMarin_Table_1_ABR.html
- 現状の治療薬との優位性 : Roche (中外製薬) の抗体医薬ヘムライブラ (1ヶ月に1回の投与)との差別化?
- 治療薬の持続性 : 上図、高用量4年の結果では、FVIIIレベルは正常域を下回っているが、患者の平均出血率は治療前136件/年から1.3~16.3件/年と治療効果は持続(継続臨床観察の実施)
- 治療効果と他社臨床動向により価格が設定される
- BiomarinはFDAとの了解で、FVIII活性を一段階測定方法から発色法(chromogenic assay)に切り替えている
- 競合開発品 :
  - Roche (Spark Therapeutics)のSPK-8011, 免疫原性とFVIIIレベルを正常範囲にできないという問題がある(P2/P3)、事前ステロイド投与で免疫原性に対処
  - PfizerのパートナーSangamo社のSB-525 (高い用量(3e13 vg/kgで効果、下図参照)^source
Source: sangamo presentation, 2 April, 2019

Evaluate Vantage, 2019/05/22
https://www.evaluate.com/vantage/articles/events/company-events/biomarin-hopes-long-term-valrox-data-can-stem-bleeding

製造能力を試算してみる

BIOMARINが持つNovato, California.の製造施設は、年間2,000~3,000人に製剤を届ける事が可能です。

すなわち、3,000人 x 6e13 vg/kg x 70kgが年間の必要量。1000L bioreactor x 2 x 20年間製造数で割ると、1.5E14 vg/Lの培養生産性であることが推定できます。

BioMarin Provides 2 Years of Clinical Data in 6e13 vg/kg Dose from Ongoing Phase 1/2 Study in Valoctocogene Roxaparvovec Gene Therapy for Severe Hemophilia A at World Federation of Hemophilia 2018 World Congress
https://investors.biomarin.com/2018-05-22-BioMarin-Provides-2-Years-of-Clinical-Data-in-6e13-vg-kg-Dose-from-Ongoing-Phase-1-2-Study-in-Valoctocogene-Roxaparvovec-Gene-Therapy-for-Severe-Hemophilia-A-at-World-Federation-of-Hemophilia-2018-World-Congress

BioMarin Provides Highlights of 4 Years of Clinical Data from Ongoing Phase 1/2 Study of Valoctocogene Roxaparvovec Gene Therapy for Severe Hemophilia A
https://www.prnewswire.com/news-releases/biomarin-provides-highlights-of-4-years-of-clinical-data-from-ongoing-phase-12-study-of-valoctocogene-roxaparvovec-gene-therapy-for-severe-hemophilia-a-301068247.html

解説

血友病A
- Hemophilia A
- X染色体に由来、遺伝、1/3のケースで突然変異
- 約10,000人に1人
- 従来、血液凝固因子第8因子 (VIII, 分子量200kDa)の機能不全に対して、血漿分画製剤による補充療法が行われる
- 重症な血友病A患者には、年間100~150回の点滴補充が行われる
- 投薬の評価方法として、年間出血率(Annualized Bleed Rate)がある
その他製品
- ムコ多糖症I（MPS I）のアルデュラザイム（ラロニダーゼ)
- ランバートイートン筋無力症候群（LEMS）のフィルダプス（リン酸アミファンプリジン)
- フェニルケトン尿症（PKU）のKuvan（二塩酸サプロプテリン）
- ムコ多糖症（galsulfacS）のナグラザイム（galsulfase）
- ムコ多糖症IV型A（MPS IV A）のためのVI）とビミジム（エロスルファゼアルファ）。当社は、さまざまな疾患の治療のためのさまざまな製品候補について臨床試験を実施しています。その臨床製品候補には、Brineura、ペグバリアーゼ、
参考文献

BioMarinの現況 (2020)
https://investors.biomarin.com/2020-02-20-BioMarins-Biologics-License-Application-for-Valoctocogene-Roxaparvovec-Accepted-for-Priority-Review-by-FDA-with-Review-Action-Date-of-August-21-2020

ファイザー社、血友病Bの遺伝子治療に関する第Ⅲ相試験を開始, 2018/08/07
SparkからPfizerへ血友病Bの遺伝治療薬開発に関すのライセンス契約に関することも記載あり。
https://www.pfizer.co.jp/pfizer/company/press/2018/2018_08_07.html

uniQure Announces License Agreement with CSL Behring to Commercialize Hemophilia B Gene Therapy, 2020
uniQure社は、血友病Bの遺伝子治療薬をCSL behringに商用化をライセンスに関しての記載
http://www.uniqure.com/PR_EtranaDez_Licensing_FINAL_6_24_20.pdf

Freeline Raises $120M for Pivotal Trial of FLT180a, a Gene Therapy Candidate for Hemophilia B, 2020
Freline社は、血友病Bの遺伝子治療のピボタル試験のために$120Mを獲得した
https://hemophilianewstoday.com/2020/07/10/freeline-raises-120m-to-support-pivotal-trial-of-flt180a-a-gene-therapy-candidate-for-hemophilia-b/
2020年4月4日
気になる企業 – VIROVEK (バイロベック) – AAV-toxin Vector技術 – ID12859 [2020/03/31]
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ID12859

VIROVEK

VirovekはSf9/vaculovirusをベースに独自のAAV-toxin技術を持つCMOである。
- Hayward, CA, US
- Sf9/BaculovirusによるAAV vectorの製造
- 研究用のAAV, Plasmidも販売
- 独自技術
  - 毒素遺伝子を持つウイルスベクター
    
    Cell Ablation Technology
    
    in vitro検証済み
    
    AAV-toxin vectorが作られた時のみ毒素が活性化される技術
  - バキュロウイルス
  - 無血清培養
- AAV製造プロセス^sourc
  - Cloning GOI into AAV shuttle plasmid : 1-2 wk
  - Generation of Bacmid and purification of Bacmid DNA : 4 d
  - Transfection of Sf9 cells to generate baculovirus : 4 d
  - Amplification of baculovirus and titration : 3d
  - Production of AAV and CsCl purification : 1w
  - Desalting, filter sterilization, and AAV titration : 2d
- カスタムメイドAAV
  - 1e13 vg scale to 3e16 vg
  - カセット
    
    Single promoter expression cassettes
    
    Dual promoter expression cassettes
    
    (toxin genes added)
    
    shRNA (with reporter gene)
    
    microRNA (with reporter gene)
    
    IRES expression cassettes
    
    P2A expression cassettes
    
    Cre-LoxP cassettes
    
    Double-floxed inverted orientation (DIO)
    
    Flip excision (FLEX) cassettes
- BSL-1
  - AAV1
  - AAV2
  - AAVr
  - AAV5.2
  - AAV6
  - AAV8
  - AAV8.2
  - AAV9
  - more
- Productivity
  - 2e13 vg/mL
  - 価格表 : 1e13 vg/$3,500 ~ 1e15 vg/$119,900
TransfectionとPlasmid

Rep-Cap Vectorと目的遺伝子のVectorをBaculovirusにinfectionさせる方法を採用してしている

VIROVEK
```
編集履歴
2020/03/31 Mr.HARIKIRI
```
2020年3月31日
気になる企業 – Yposkesi (イポスケシ) – ヨーロッパ最大のAAV/Lentivirus Vectorの生産能力を誇る – ID12817 [2020/03/31]
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Yposkesi

YposkesiはフルサービスCDMOである。
- フランス
- Genenthonのスピンオフ, 2016
  - 患者団体 AFM-Telethon (イタリア)
  - SPI投資ファンド
- 50,000 ft2 (5,000m2)
  - up to 100,000 ft2 2021
  - Start at 2022 for commercial production and EMA and FDA compliance
- 4 suites for drug substance
- 2 suites for fill & finish
- 175人
- プロセス開発
  - 2 to 10L bioreactor (suspension)
  - Adherent
  - トランスフェクション
    
    DOE
    
    Ratio of Plasmid DNA/Transfection reagents/Cell density
    
    Ration Full/Empty
    
    vector constructionの比較
- 分析法開発 (analytical development)
  - assays qualification
  - validation
- ウィルベクターGMP製造 (BSL 2)
  - 33 batches / year
  - 2 x 200L single use bioreactor
  - 500L single use bioreactor
  - 24 Cell Factory 10
  - purification
    
    Depth→UF/DF→Affinity→IEX→Size exclusion
- Fill & Finish
  - Crystal(R) Closed Vial Technology
    
    AsepticTechnologies(R), 1mL (Cyclo-Olefin Co-polymer)
  - glass vials
    
    250μL to 4.5 mL
  - 100%目視検査 → Labeling
  - BSL2 class C area, and grade A containment isolator
  - 手動/半自動
  - 300 vials/batch
- QC
  - capability
    IR detection western blot
    DLS
    subvisible particle counting(light obscurantism or microscopy)
    and general
  - GP QC team
    environmental monitoring test
    utility test (water system)
    Controls of all incoming raw material
    in-process control and release assays
    internally lab
    subcontractors
    Runs stability studies
    <-135℃, <-80℃, <-20℃, 2~8℃, 15℃ to 25℃
  - Analytical development, tech transfer, validation
- QA
- Regulatory Support
  - 臨床ロットに必要な文書の作成
    
    Bill of material
    
    新しい原材料の登録
編集履歴
```
2020/03/31 Mr.HARIKIRI
```
2020年3月31日
気になる企業 – GENETHOD – 遺伝子治療開発を手掛けるフランスの非営利団体 – ID5079 [2020/03/29]

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Webinar on ThermoFisher

フランスのGENETHONは現在、ThermoFisherの傘下になったアメリカのBRAMMERとの間で、遺伝子治療薬のウイルスベクター製造における改良研究について共同発表しました。(Accelerating advancement in gene therapy by improving downstream purification of viral vectors)

https://vimeo.com/357326837

GENETHONとBRAMMERの共同発表のビデオから。

GENETHON

参考文献1 (2015)からの発表

フランスのエブリーにあるGenethonは、フランスの筋ジストロフィー協会（AFM）であるAFM-Telethonによって設立された、非営利のR＆D組織

孤児の遺伝病の研究から臨床検証までの開発に取り組んでいます。 Genethonは遺伝子治療薬の発見と開発に特化しており、神経筋、血液、免疫系、および肝疾患の臨床、前臨床、および研究段階で複数の進行中のプログラムがあります。

Brammer Bio

Brammer Bioの製法では、AAVX resin (50 ~ 70% Elution)を使い、回収率は、平均60%を達成しています。

AAVX resingから漏れ出たLigandの残存量は、8 (ng/1E12 vector gene (vg) )

参考文献1

「AAV vector – Slide – GENETHON, 2015
Baculovirus」より、AAV9 vectorの精製工程とその回収率などの情報を以下に抽出しました。

(1) AAV9 vector : Harvest (100%)→CEX (60%)→AEX(negative mode, 30%)→AEX (25%)→TFF (20%) →Sterile Fitration: 20% overall

(2) AAV9 vector : Harvest (200L, 100%)→AAVX (1E12 vg/mL at 450cm/h, 30% full particles,3E12 capsids/mL 80%, DNA reduction factor: 3 to 4 log) →UF/DF (80%) → Sterile Filtration (50mL, 1e13 vg/mL, 80%): 50% overall
https://www.slideshare.net/PatrickBasanez/bils-2015-genethon-m-hebben

関連記事


2020年3月29日
気になる企業 – Catalent Biologicsの特徴は、retrovectorを使うGMEx技術による高生産性 -ID12544 [2020/08/05]
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Catalent Biologics

Catalent Biologicsは、バイオ医薬品のCDMOです。
- 2019年の売り上げは、約2,520億円 source
- 2022年からBloomington Siteの拡張オープン
バイオロジクスにおいて、生産株の構築技術に関してretrovectorを用いる先進的な手法に特徴(GPEx)がある。又、コマーシャル品の実績を積んでいる。今流行りの遺伝子治療法を生産株に向けて行うものと考えれば分かりやすい。

GPEx : <5m, Beacon Clonal Selection, ambr, 2L, 250L, Purification -> 2,000L x2 in Madison, in future commercial

https://biologics.catalent.com/
- 5つの大陸
- 30以上のサイト
- 10,000 employees (Catalent全体)
- バイオロジク関連の製造機能の増強
- 遺伝子治療の製造機能の増強 (2017~)
- Cell line開発 (GPEx, GPEx BOOST)
- 2018年に1つのユニットを分割
  - (1)経口デリバリー
  - (2)BiologicsとADC
Cell Line開発
- GPEx technology²⁰²⁰
  - GMEx retrovectorにタンパク質遺伝子をパッケージング
  - 選択した動物細胞(mammalian cell)に形質導入
  - mammalian cell
    
    CHO, HEK293, PER.C6, CAP
  - Stability demonstrated up to 100 generations, no need for selectable markers (安定性試験は不要)
  - 600 different monoclonal antibodies
  - 80 different recombinant proteins
  - over 7g/L production for standard mAbs
  - 12 commercially approved products
  - 120+ ongoing clinical trials
- GPEx BOOST
  - CHOZN(R) glutamine synthase (GS) knock-out CHO cell line
  - 10g/L production for standard mAbs
  - for difficult-to-express protein
  - Higher cell density
  - 培養時アンモニア低減
CatalentのBiologicsサービス

CatalentののBilogicsサービスの詳細は、リンクhttps://biologics.catalent.com/biologics/から確認できます。興味がある原薬製造に関して、バイオリアクターのスケール等は、以下に情報をまとめました。

製造の機能
- Biologics development and manufacturing in Madison, WI(ウィスコンシン州)
  - cGMP: 2 x 2,000L single use bioreactor²⁰²⁰
  - BIoreactor/Scale
    
    Sartorius ambr15
    
    2L ~ 10L glass
    
    20L/50L WAVE Single-Use
    
    50-2000L HyClone Single-Use
    
    Finesse Controllers
- in Bloomington,IN
  - cGMP: 2 x 2,500L Stainless Steel Bioreactors
  - Bioreator/Scale
    
    50L single-use stirred
    
    20L – 2,500L stainless-steel
    
    Delta V Control System
  - Fill/Finish
    
    液剤 : INOVA isolator
    
    凍結乾燥
    
    Prefilled syringe
    
    Flexible Filling Line YouTube
- Fill/Finish services in Brussels (BELGIUM) and Limoges, France (small and dedicate)
- Fill/Finish & packaging/Labeling (液剤) in Anagni (Italy)
- SMARTag(TM) conjugation technology in Emeryville, CA (カリフォリニア州)
  - ADC技術 (バイオコンジュゲート技術)
  - Roche(は、非独占的権利を取得)と共同開発
  - 様々な治療法の組み合わせによる次世代分子の創出
- Biologics analytical network
- Clinical Supply Service
  - delivery to clinical site
2022現在、非公開となった。Integrated Development, Analytical and Biomanufacturing Services at Madison, WI: ²⁰²⁰

https://youtu.be/q3e-RCbVx6g

2022現在、非公開となった。Process Development ²⁰²⁰

https://youtu.be/N9jhfVdeQAM

Integrated Development, Analytical and Biomanufacturing Services at Bloomington, IN: ²⁰²⁰

製剤の機能
- 2017年 Cook GroupからCook Pharmicaを買収($750M)²⁰¹⁷
  - Headquarterd in Bloomington, IN(インディアナ州), A棟, B棟
  - 750 employees
  - Bloomington facility. (2004~, 875,000ft²)
  - Sterile formulation and fill/finish
    
    liquid/lyophilized vials
    
    prfilled syringes
    
    cartridges
  - cell line engineering
  - bioconjugate development
  - analytical services
  - biomanufacturing
- 遺伝子治療に注目している
Syringe filling

LOCATIONS

Syringe filling ²⁰²⁰

Anagni, Italy
Bloomington, Indiana
Brussels, Belgium

関連イベント

2020/02 Zumutor Biologics Inc.(Headquarter in Cambridge, MA, R&D in Bangalore, India)とのNK細胞活性化抗体の共同開発契約締結 ²⁰²⁰

2019年、遺伝子治療メーカーのParagon Bioservicesに12億ドルを支払いました。

Catalent to buy Paragon for $1.2B as gene therapy demand grows, 2019/04, Biopharma Dive – より
https://www.biopharmadive.com/news/catalent-to-buy-paragon-for-12b-as-gene-therapy-demand-grows/552750/?fbclid=IwAR0Xi95csG6wdXAD7nvR-gyuk54BdnVAXitahs1X1-hrGjo8uurzLDJzjoM

Paragonの買収

遺伝子治療メーカーのParagon Bioservicesを1.2bドル(記事元:BioPharma Dive)で買収(1,200億円)したと2019/04/15に発表しました。CatalentのCEO, Marc Funkは、以下のように語った。
```
遺伝子治療分野を2年間見てきた。今回の買収は妥当である。
```
- Paragon Bioservies (2018年度の収益は、1.1億ドル
- CMO事業
- rAAVベクター製造
- 買収額 12億ドル(1,200億円)
- 2つの製造施設
- 380人
- 2020/Q3には、325,000ft2の製造スペースを準備できる
- EDITDA成長として、今後8~11%を見込む
```
記事元のBioPharma DiveのCEOは、”Lonzaは2018/04に300,000ft2の遺伝子治療用医薬品製造工場を解説し、これまでに45を超える顧客のウイルス・ベクターに取り組んできた。ウイルス・ベクター製造は急速に増加している”、と語った。
```
関連記事

遺伝子治療薬関連 – ThermoFisherによるBrammer買収

Virus VectorのCDMOであるBrammer Bioを17億ドルで買収に合意した。Michel Lagarde, (president of pharma services)は、遺伝子治療開発者は、まだネットワークを構築できていないと語った。Lagardeは、遺伝子治療関連の総支出の65%が、まだアウトソースしてないと語っている。

大手のバイオ医薬品会社

Novartis, Roche, Biogenのような大手バイオ医薬品会社は、2018年から遺伝子治療関連の買収を行っており、自前での製造が可能となっている。

編集履歴
```
2020/03/29 はりきり(Mr)
2020/05/16 追記(大幅な情報を追記、各サービスのビデオがあり初学者には理解が進む)
2020/08/05 追記(Bloomingtonサイトの拡張とフルサービス開始について)
```
2020年3月29日
気になる企業 – Oxgene™️ (Oxford Genetics LTD) – LentivirusのPCL/rAAV高生産できるHEK293細胞株/PCLの構築手順 – ID12556 [2020/11/22]
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Oxgene™️
- Headquarter : San Francisco (HQ), Ca United States source linke
- Oxgene™️は、Lentivirusに注力するOxford Genetics社の技術ブランドです。その中心的技術は、
- FaceBookの投稿から、以下の5領域が強みのようです。
  - / Our new packaging and producer cell lines for #scalable #lentiviral manufacture of new #celltherapies.
    (細胞治療としてLentiviralのスケーラブルなのPCL)
  - / An innovative new technology for scalable #AAV production that we hope will completely change the way #genetherapies are manufactured.
    (革新的なAAVのスケーラプルな製造技術)
  - / A mammalian display #antibodydiscovery platform that self-labels when antibodies bind to the target membrane protein
    (哺乳動物細胞による膜タンパク質に結合する抗体があれば自己標識する探索プラットフォーム)
  - / How we’ve adapted our #CRISPR engineering workflow to reliably edit #iPSCs
    (多機能幹細胞を編集する最適化されたCRISPRエンジニアリング・ワークフロー)
  - / How our proprietary in house laboratory information management system is keeping us on track, and keeping our partners informed, in real time.
    (社内の実験情報マネジメント・システムは、情報をリアルタイムに提供する)
- その他、AAV5を高産生するHEK293細胞株を、GMPでセルバンク化しています。この細胞株は、他の血清型のAAVやレンチウイルスでも高生産性が得られる。
- OXGENE has developed a novel CHO-based mammalian display antibody technology targeting membrane proteins.
Oxgene™️ by Oxford Genetics LTD
https://www.oxgene.com/

ショートヒストリー

A Short History of Gene Therapies – News MEDICAL LIFE SCIENCES –
https://www.news-medical.net/whitepaper/20200601/A-Short-History-of-Gene-Therapies.aspx

生産細胞株

Lentivirus

Lentivirus生産株として、GOI plasmidを除くCell Line (Packaging Cell Line)を持っている (Lenti packaging cell line) source
- 浮遊系細胞であるHEK293
- 目的遺伝子を導入したProducer Cell Lineの作成にも使用可能
- Develop and characterisation of cGMP-compliant stable packaging cell line for inducible lentiviral vector production PDF source link
- source link
Developing lentiviral packaging and producer cell lines

合計3のブラスミドを導入する。2つをトランスフェクションの時点でPackaging cell line,　最後のGOIを導入した時点でProducer cell lineという。
- Step 1 (Design and optimize)
  - VSV-G, Gag/Polのデザインと最適化
  - Plasmid取得
  - HEK293細胞へのトランスフェクション
- Step 2 (single cell sort)
  - 安定プール細胞をソーティング(50~60/96 well plates
  - 拡大培養とクローンのモニタリング (自動化装置)
- Step 3 (10クローン選択)
  - クローン選択
    
    growth kinetics
    
    VSV-G and Gag/Pol 導入
    
    誘導なしの拡大培養
    
    500~600クローンから40~50選択(トランスジーンを含む)
    
    10クローン選択 (lentiviral生産)
- Step 4 (Top clone選択)
  - 拡大培養
  - 培養のCharacterize and Optimize
  - lentiviral生産の条件
  - growth profile
  - VSV-G and Gag/Pol コピー数
  - 適する培地、トランスフェクションにおける細胞濃度、トランスフェクション試薬、添加剤
- Step 5 (final pre-packaging cell line取得)
  - 試験
    
    stability
  - further rounds of cell line development
  - Cell banking
- Step 6 (GOIデザインと最適化とpackaging cell lineへのトランスフェクション)
  - Rev (packaging cell lines), Gene of interest (GOI)のデザイン
  - Transfect to pre-packaging cell line)
  - 安定プール株の選択
- Step 7 (Single cell sort)
  - 20-30 clones to 96 well plates
  - expand
  - monitor clone growth
- Step 8 (スクリーニング to 300~400 clones)
  - growth kinetics
  - Rev and or GOI integration
  - lentiviral production
- Step 9 (Top 10 selection)
  - further expand
  - characterize
  - optimize growth
  - transfection/induction condition
  - growth profile
  - VSV-G
  - Gag/Pol
  - Rev and/or GOI copy number
  - Supplementation
  - if neccessary, goto step 6 as a allternative route to develop producer cell lines from lentiviral packaging cell lines
- Step 10
  - Select final packaging and producer cell line(s)
- Step 11 (process development)
  - optimize growth
    
    packaging cell line
    
    producer cell line
  - transfection conditions
    
    packaging cell line
    
    improve final titer
  - transfection-free
    
    producer cell line
Developing lentiviral packaging and producer cell lines, 2020/11
https://www.regmednet.com/infographics/developing-lentiviral-packaging-and-producer-cell-lines/?utm_campaign=RegMedNet&utm_content=146236346&utm_medium=social&utm_source=linkedin&hss_channel=lcp-11529313

CRISPER技術

CRISPR関連の技術を有する1)
- Cell line engineering
- CRISPR screening
- Cas9 engineering
AAVシステム
- 優れたAAVシステムを持っている
- HEK293細胞
  - AAV産生に最適なクローンの設定を完了している
- CHO細胞を用いている
- FUJIFILM Diosynth Biotechにライセンスを提供している
CRISPRとは、
- CRISPR-Cas9（clustered regularly interspaced short palindromic repeats / CRISPR associated proteins）
- DNA二本鎖の任意の位置を切断（Double Strand Breaks=DSBs）し、新たに遺伝子を挿入したり、遺伝子を置換・削除できる遺伝子改変技術。
- 2013年に報告されたCRISPR-Cas技術は、ZFN、TALENに続く第3世代のゲノム編集ツールである
- 標的遺伝子の変更、複数遺伝子のターゲットが容易
- 現在、哺乳類細胞ばかりではなく、細菌、寄生生物、ゼブラフィッシュ、など細胞や生物種において、そのゲノム編集利用されている。
- CRISPR-Cas9システムは、細菌や古細菌においてウイルスやプラスミドといった遺伝的要素の侵入物を標的し、排除するよう進化した適応免疫の一つ
1)

CRISPR – Libraries and screening

2)

CRISPR-Cas9の情報

DNA二本鎖を切断してゲノム配列の任意の場所を削除、置換、挿入することができる新しい遺伝子改変技術特集：CRISPR-Cas9 とは – コスモバイオ – より
https://www.cosmobio.co.jp/product/detail/crispr-cas.asp?entry_id=14354

3)

FUJIFILM Diothynth Biotechnologies社との提携

Fujifilm Diothynth Biotechnologies (FDB)社はOxford Genetics社のOxgene独自のAAVシステム(遺伝子治療関連)のライセンスを受けており、FDBの製造サイトでは顧客に対してサービスを提供している

遺伝子治療の分野で、FUJIFILM Diothynth Biotechnologies社との戦略的パートナー契約を結んだ (2020/04) – OXGENEサイト – より
https://www.oxgene.com/News-and-Events/News/2020/04/FDB-partners-with-OXGENE

4) Celebrating 40 Years

Live and let live: the remarkable story of HEK293 cells in April’s Human Gene Therapy – Oxgene より

HEK細胞(E1遺伝子がインテグレートされている)でのみ増殖できるアデノウイルス(E1遺伝子を欠く)のグラハム(Graham, 1973~)の研究 – E1遺伝子は、E1遺伝子がHEK293細胞とE1遺伝子を欠いたアデノウイルスとに、完全に切り分けできていないため、重複する領域が存在する。そのことで、相同組換えが起こり、そのアデノウイルスは、E1を獲得して野生型となっていまう問題があるることがわかりました。1999年の臨床試験では10代の肝臓関連の患者が死亡しました。2016年には、アデノウイルスは、腫瘍溶解による癌治療として使用されています。遺伝子補充療法分野では、AAVとレンチウイルスベクターが使用されるようになりました。
現在の遺伝子補充療法分野での課題は、スケーラプルな製造方法です。現状では、遺伝子治療にはね200万ドル以上かかると試算されます。OXGENEでは、HEK293細胞を技術の中心にして、AAV5などを効率的的に生産できるように研究をしています。(1)メディア、(2)AAV作成が高いHEK293細胞のクローニング、(3)その他のAAVやレンチウイルスでも高い生産性を示しました。この細胞株をGMPによるセルバンクとすることができました。

https://www.liebertpub.com/doi/10.1089/hum.2020.29116.oxg

5)

Achieving High-Yield Production of Functional AAV5 Gene Delivery Vectors via Fedbatch in an Insect Cell-One Baculovirus Sytstem (2019) – Methods & Clinical Development – より
https://www.cell.com/molecular-therapy-family/methods/pdf/S2329-0501(19)30020-8.pdf

6)

Scalable Production of AAV Vectors in Orbitally Shaken HEK293 Cells (2018) – Methods & Clinical Development -より
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6305802/#!po=26.7045

7)

Manufacturing of viral vetors for gene therapy: part I. Upstream processing (2014) – Pharm. Bioprocess -より
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6305802/#!po=26.7045

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2020年2月20日

ジュジェンヌ型筋ジストロフィーの治療薬の研究として、AAVを活用したゲノム編集型遺伝子治療研究の文献を概説し、既に市販されているアンチセンス核酸医薬品の作用機序などを示して、筋ジストロフィーという希少疾患を知る。

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2019年10月6日

Post Views: 190 CRISPR CRISPRは，clustered regularly interspaced short palindromic repeatの略号です．京都大学より CRISPRとはC…
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2020/03/25 はりきり(Mr)
2020/05/24 追記 (ウイルスを高生産するHEK293細胞株)
2020/09/16 追記 (5つの主たる強み)
2020/11/22 追記 (lentivirusのPLCの作り方)
```
2020年3月25日
気になる企業 – Thermo Fisher – QIAGEN社の買収断念(TOB失敗) – ID11357 [2020/08/13]
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ThermoFisher Scientific

会社概要
- 買収にひた走りバイオロジクスの関連分野(試薬からCDMO、SCM)のワンストップ化を目指している
- 2019年の売り上げは、約2.6兆円
- 75,000人/global
- グループ会社
  - Patheon (mAb manufacturing)
  - Brammer (rAAV vector Gene Therapy manufacturing)
  - Applied Biosystems
  - Finesse (Bioreactor control system, 2017)
イベント

買収にひた走る
- 2020/03 QIAGEN社(ドイツ)の買収案承認
- 2020/08 QIAGEN社株主が買収案を拒否(COVID-19関連需要好調のため)
ThermoFisher Scientificは、2019年初頭にBrammer Bioの買収を完了(17億ドル)している。更に、年末には、90M USDでCDMOサイトをマサチューセッツ州レキシントンに完成し、主要なウイルスベクターについてCDMOサービスを事業に追加した。

Brammer
- 2016/03/31, Florida Bilogix (フロリダ大学からのスピンオフ、開発、初期臨床で10年の実績)とBrammer Bio pharmaceuticalsが合併
- 機関投資家はAmpersamd Capital Parners
ケンブリッジ

マサチューセッツ州
- $9,000m
- レキシントン(Lexington)施設: Brammerオフィス
- 50,000ft2
- 200人規模
- GMP
- ウイルスベクター開発・製造
- テスト
- 製造
フロリダ州
- アラチュア(Alachua)の施設の増強中(2020年に完成予定)
- - ~2017 : クリニカル能力の倍増
  - ~2018 : プロセス開発、分析開発、QC
  - Virus Vector Servicesのフットプリントが58%増加
  - 倉庫の増設
  - 80,000 ft²
  - 100人(2016年)→250人(2019年)
USA内での能力は
- 施設 : 15
- >2,500人
Thermo Fisher Scientificがマサチューセッツ州に9,000万ドルのウイルスベクター製造サイトを開設
https://www.prnewswire.com/news-releases/thermo-fisher-scientific-opens-90-million-viral-vector-manufacturing-site-in-massachusetts-300968837.html

Thermo Fisher opens $90M viral vector manufacturing plant in Massachusetts – BIOPHARMA DIVE
https://www.biopharmadive.com/news/thermo-fisher-90-million-viral-vector-manufacturing-massachusetts/568450/

編集履歴
```
2020/03/23 Mr.HARIKIRI
```
2020年3月23日
気になる企業 – Brammer Bio社 – 開発段階から初期商用製造まで対応可能な豊富な経験を持つ遺伝子治療用の原薬 CDMO – ID11884 [2021/02/24]
Post Views: 274

ThermoFisherグループ

ThermoFisherは、rAAVによる遺伝子治療に関するCDMOサービスを提供するために、Brammer Bioを買収しました。

遺伝子治療のためのAAVやその他のウイルス・ベクターについてUSPおよびDSPのプロセス開発を行えるCDMOです。CDMOとは、このような開発ノウハウを持ち、スケールアップ開発も可能で、臨床用のGMP製造も可能な委託製造会社です。Brammerは、数多くのプロジェクト実績を持っています。

現在の治療対象は、症例数が少ないオーファンが多いので、200L程度のバイオリアクターで製造されるのがほとんどでした。しかし、今後の開発競争においては、症例数が多く且つ、全身投与などの投与量が多い症例へとシフトしてくるものと予想されます。製造装置としても更に大きなスケールアップが可能性なCDMOが求められることになってくると考えられます。具体的には、スケールアップの製造ノウハウや実際に持っている大きなバイオリアクターが競争優位性の重要なファクターになるものと思われます。

2019/3にThermoFisherによるBrammer Bioの買収を17億ドルで合意
https://www.genengnews.com/news/thermo-fisher-to-acquire-brammer-bio-for-1-7b-expanding-gene-therapy-presence/

ThermoFisherが買収することで、AAVベクターを用いた遺伝子治療用医薬品の製造が、世界的に本格化していることが垣間見えます。抗体医薬品のCDMOであるLONZA BIOLOGICSもAAVベクターのCDMOとして自社の設備の整備を完了しており、世界のバイオロジクスは、抗体医薬から遺伝子治療医薬へ舵を切ったといえます。
- 前臨床プロセス開発
- プロセス最適化
- スケールアップ
- 分析
- 製剤化
- 保管サービス
- 規制サポート
- 施設は、FDA Code of Federal Regulations (Part 21)及びEuropean Advanced Therapy Medicinal Products’ regulationsに適合するウイルスベクター製造が可能
Brammer Bio

Brammer Bio
https://www.brammerbio.com

経験
- first-in-human trials : 100以上のプロジェクト
- Clinical lots AAV, ADV, RV, HSV, LV and T-cells : >150
- Team members : >350 ( over 20 years of experience)
拠点
- フロリダ州アラチュア　(本拠地)
- マルチプラットフォーム : 哺乳類/昆虫細胞の生産
- 50L ~ 2000L Bioreactor
- 安定性試験
- 製剤化、保管、流通 (商業供給)
編集履歴
```
2020/03/12 はりきり(‘Mr), ThermoFisherに買収されてからの調査
2021/02/24 追記 (Brammerの説明、遺伝子治療CDMOの説明)
```
2020年3月12日
気になる企業 — AMRA Medical社 – 脂肪量、筋肉量を3D解析する技術 – ID11842 [2020/03/12]
Post Views: 212

レポート内容

AMRA Medical社は、2010年、スウェーデンのリンシェーピングで設立された、大学発、スピンオフのデジタルヘルス企業です。
- AMRA, Badhusgatan 5, Linköping 58222 Sweden
- リンショービン大学
  - Center for Medical Image Science and Visualization (CMIV)
  - Department of Biomedical Engineering (IMT)
  - Department of Medicine and Health (IMH)
迅速な全身MRIデータを自動化されたクラウドベースの画像解析技術(特許)による解析により、臨床的に重要な脂肪および筋肉量の小さな変化を高い精度で見ることができます。

MRI画像データをAMRAに送ると、AMRAのシステムにより解析・洞察を提供してくれます。

医療機器としてFDAより承認を受けています。

応用分野
- 臨床試験
- 学術研究
- ヘルスケア
The New Global Standard in Body Composition Assessment
https://www.amramedical.com
2020年3月12日