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[rAAV-Edu] rAAVベクターのFull/Empty ratioの改善のヒント

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Full & Empty ratio

rAAV Vectorの実製造にあたって、ウイルス粒子に封入させたい目的の遺伝子をパッケージングしている完全体粒子(full)と遺伝子をパッケージングしていない、又は部分的である不完全体(empty)の比率を改善するすることは、生産性の効率化に避けては通れない課題である。

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今回参照する文献によると、図1に示す実験条件で、Full/Empty比率を培養工程において確認した結果がある。

表1のようにTransfectionから時間が経過するほどFull particlesの絶対数はMediaとPelletを合計しても低下した。

  • MediaにおけるFull particles数は、Transfectionから日数が経過するほど増加した(1)
  • PelletにおけるFull particles数は、Transfectionから日数が経過するほど減少した(2)
  • MediaとPelletを混合してrAAVベクターを製造する場合を想定すると、Empty particles数は、日数が経過するほど増加、すなわち、Full particles数は、減少した(3)
https://www.researchgate.net/profile/Matthew_Benskey/publication/293825466_Continuous_Collection_of_Adeno-Associated_Virus_from_Producer_Cell_Medium_Significantly_Increases_Total_Viral_Yield/links/56e0583208ae9b93f79c2d8e/Continuous-Collection-of-Adeno-Associated-Virus-from-Producer-Cell-Medium-Significantly-Increases-Total-Viral-Yield.pdf?origin=publication_detail
図1. TransfectionからHarvest期間

Sample(1) Full in Media(2) Full in PelletEmpty in MediaEmpty in Pellet% Empty in Pellet% Empty in Media(3) %Empty in Pellet & Media
3 day1384151818417210%12.1%11%
5 day1466133728117219.1%16%13%
7 day1512118122840625.3%13.2%19%

Continuous Collection of Adeno-Associated Virus from Producer CellMedium Significantly Increases Total Viral YieldMatthew J. Benskey,1Ivette M. Sandoval,1and Fredric P. Manfredsson

https://www.researchgate.net/publication/293825466_Continuous_Collection_of_Adeno-Associated_Virus_from_Producer_Cell_Medium_Significantly_Increases_Total_Viral_Yield

考察

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MediaとPelletでのFull Particle数の合計が、Transfection後の3日後が最も高かったが、その後、7日後まで減少が続いた。この減少する原因について以下のように考察する。

  • Pellet内のFull Particleの減少傾向は、Full Particleの合成効率が低下している
  • 又は、Pellet内でのFull Particleの安定性が不良である
  • Full ParticleのTransfectionからHarvest工程までの期間での安定性が不良である

編集履歴

2019/09/18 はりきり(Mr)
2020/06/12 整備(Gutenberg blockに変換)
2021/10/15,追記(考察)
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full

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Vector

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