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AAV BIOLOGICS purification

[rAAV] AAB SepharoseによるrAAVの精製, 2009 – ID2461 [2019/09/28]

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[rAAV] AAB SepharoseによるrAAVの精製, 2009 – ID2461 [2019/09/28]
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AVB Sepharoseによるsf9細胞由来のrAAVの精製

AAVを精製するクロマト機材

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  1. Sf9 cell (10e8)のバキュロウイルスによるTransfection 1hr処理
  2. その後3daysの培養後
  3. cellをharvestして、Detergent処理して抽出液を回収
  4. capside化しなかったDNAなどをBenzonase処理により分解処理
  5. Affinity Column精製 (10 mm x 100 mm, AVB Sepharose High Performance)
  6. Washing: PBS(pH7.4)
  7. Elution: low pH glycine-HCl (pH2.7)
  8. Elution peak tiger: 1.7 x 10e13 particles/mL
  9. Purity: >90% (4-12% SDS-PAGE)
  10. AAV-1のVP1(81.4kDa), VP2(66.2kDa), VP3(59.6kDa)

Abbreviations: NRP, nuclease-resistant paticle; TU, transduction unit.

評価

nuclease resistance particles/cell: 3.7 x 10e4 ~ 9.6 x 10e4

文献

A Simplified Baculovirus-AAV Expression Vector System Coupled With One-step Affinity Purification Yields High-titer rAAV Stocks From Insect

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1525001616308000
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ここまで

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