[rAAV-DSP] AAB Sepharose High Performance – ID2292 [2019/09/21]

AAB Sepharoseの概要

吸着可能なAAVの血清型

• AAV1
• AAV2
• AAV3
• AAV5

Resinの特性

• Binding Capacity: >10e12 vg/mL of resin
• 組換え酵母で作られた蛋白質(14kDa)
• Resingの安定性: 文献

概要

低pH溶出と比較して、高pH溶出および0.5または1.0 Mアルギニンでは、収量は低下したが、アルギニンを含む高pH溶出バッファーは、AAV純度が高くなることを示しており(260/280)、高pH溶出は、低pHでは敏感なウイルスを精製するための代替手段となる。

Elution bufferの種類

• EB1 0.1 M sodium acetate, 0.5 M NaCl, pH 2.5
• EB2 0.1 M sodium acetate, 0.5 M NaCl, 0.5 M arginine, pH 10.0
• EB5 20 mM Tris-HCl, 2.5 M MgCl2, pH 8.0
• EB6 0.1 mM sodium acetate, 2.5 M MgCl2, pH 2.5
• EB7 0.1 M glycine, 0.5 M NaCl, pH 3.0
• EB8 20 mM Tris-HCl, 0.5 M NaCl, 0.5 M arginine, pH 10.8
• EB9 1.5 M NaCl, 0.02% (w/v) TweenTM 80, 50% (v/v) ethylene glycol, 20 mM L-histidine, 20 mM CaCl2, pH 6.

Load Sample/Column information

• Empty Column : Tricorn 5/50 (1 mL column volume)
• Resin : AVB Sepharose High Performance, 1 mL
• Equilibration buffer : 20 mM Tris-HCl, 0.5 M NaCl, pH 8.0
• Load Sample : rAAV, 7x10e10 vg/mL x 20 = 1.4x10e12 in Equilibration buffer / 0.2 μm filter, 20 mL
• Flow rate : 153 cm/h
• AAV ELISA測定

Study 1

1. 1st Elution buffer: EB1(recovery 120% of 130% total recovered virus: batch wiseと結果が真逆)
2. 2nd Elution buffer: EB8 (recovery 6%)

Study 2

• Elution buffer : EB3(recovery 72% of 73% total recovered virus

Study 3

• Elution buffer : 20mM Tris-HCl, 0.5M NaCVl, 1.0M arginine, pH10.8 (recovery 62% of 64% total recovered virus)

AVB SepharoseTM High Performance, GE Healthcare

https://gels.yilimart.com/Assets/Images/doc/file/28411211_DATAFILE_01.PDF

rAAV-production

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