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AVB Sepharoseによるsf9細胞由来のrAAVの精製
AAVを精製するクロマト機材
- Sf9 cell (10e8)のバキュロウイルスによるTransfection 1hr処理
- その後3daysの培養後
- cellをharvestして、Detergent処理して抽出液を回収
- capside化しなかったDNAなどをBenzonase処理により分解処理
- Affinity Column精製 (10 mm x 100 mm, AVB Sepharose High Performance)
- Washing: PBS(pH7.4)
- Elution: low pH glycine-HCl (pH2.7)
- Elution peak tiger: 1.7 x 10e13 particles/mL
- Purity: >90% (4-12% SDS-PAGE)
- AAV-1のVP1(81.4kDa), VP2(66.2kDa), VP3(59.6kDa)
Abbreviations: NRP, nuclease-resistant paticle; TU, transduction unit.
評価
nuclease resistance particles/cell: 3.7 x 10e4 ~ 9.6 x 10e4
文献
A Simplified Baculovirus-AAV Expression Vector System Coupled With One-step Affinity Purification Yields High-titer rAAV Stocks From Insect
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1525001616308000
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用語の解説、関連タグ付き投稿の抽出
rAAV-production
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