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[rAAV-DSP] AVB Sepharose High Performance – ID2292 [2019/09/21]

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harikiri

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AVB Sepharoseの概要

吸着可能なAAVの血清型

  • AAV1
  • AAV2
  • AAV3
  • AAV5

Resinの特性

  • Binding Capacity: >10e12 vg/mL of resin
  • 組換え酵母で作られた蛋白質(14kDa)
  • Resingの安定性: 文献

概要

低pH溶出と比較して、高pH溶出および0.5または1.0 Mアルギニンでは、収量は低下したが、アルギニンを含む高pH溶出バッファーは、AAV純度が高くなることを示しており(260/280)、高pH溶出は、低pHでは敏感なウイルスを精製するための代替手段となる。

Elution bufferの種類

  • EB1 0.1 M sodium acetate, 0.5 M NaCl, pH 2.5
  • EB2 0.1 M sodium acetate, 0.5 M NaCl, 0.5 M arginine, pH 10.0
  • EB5 20 mM Tris-HCl, 2.5 M MgCl2, pH 8.0
  • EB6 0.1 mM sodium acetate, 2.5 M MgCl2, pH 2.5
  • EB7 0.1 M glycine, 0.5 M NaCl, pH 3.0
  • EB8 20 mM Tris-HCl, 0.5 M NaCl, 0.5 M arginine, pH 10.8
  • EB9 1.5 M NaCl, 0.02% (w/v) TweenTM 80, 50% (v/v) ethylene glycol, 20 mM L-histidine, 20 mM CaCl2, pH 6.
Load Sample/Column information
  • カラム : Tricorn 5/50 (1 mL column volume)
  • レジン : AVB Sepharose High Performance, 1 mL
  • 平衡化バッファ : 20 mM Tris-HCl, 0.5 M NaCl, pH 8.0
  • ロードサンプル : rAAV, 7x10e10 vg/mL x 20 = 1.4x10e12 in Equilibration buffer / 0.2 μm filter, 20 mL
  • 線流速 : 153 cm/h
  • 溶出液評価: AAV ELISA測定
Study 1
  1. 1st Elution buffer: EB1(recovery 120% of 130% total recovered virus: batch wiseと結果が真逆)
  2. 2nd Elution buffer: EB8 (recovery 6%)
Study 2
  • Elution buffer : EB3(recovery 72% of 73% total recovered virus
Study 3
  • Elution buffer : 20mM Tris-HCl, 0.5M NaCVl, 1.0M arginine, pH10.8 (recovery 62% of 64% total recovered virus)

AVB SepharoseTM High Performance, GE Healthcare

https://gels.yilimart.com/Assets/Images/doc/file/28411211_DATAFILE_01.PDF

編集履歴

2019/09/21, Mr.HARIKIRI

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