![[Bio-Lab] MasterFlex Pump – ID9538 [2020/02/16]](https://harikiri.diskstation.me/myblog/wp-content/uploads/2020/02/1125658B-098D-43F6-BCA2-463F62511E02.png)
マスターフレックス・ポンプは、ラボにおけるタンパク質の精製には欠かせない機材です。バッファー組成を置換する場合にUF/DFシステムの構成に必要です。オープンカラムによる自作システムとして、自作充填したカラムへの送液にも使います。
![[Bio-Lab] HORIBA pH Meter – ID9527 [2020/02/16]](https://harikiri.diskstation.me/myblog/wp-content/uploads/2020/02/924ED148-79BB-4B83-91EC-F744B62354A9.png)
100μLのサンプル液量があればpH測定可能。精度は型番により0.1, 0.01のタイプがある。
タンパク質の精製条件の検討には、同シリーズの電導率計とともに欠かせない。
96 well plateを使用したレジンのスクリーニングや、特定レジンでの条件検討にも、欠かせないアイテムです。
コンパクトpHメーター・水質計
![[Bio-Lab] NanoDrop – タンパク質濃度の測定 – ID9517 [2020/02/16]](https://harikiri.diskstation.me/myblog/wp-content/uploads/2020/02/8DD6E25A-102B-4866-9DEB-8C6034B5E509.jpeg)
4μLでUV スペクトルおよび固定波長も測定できます。タンパク質の条件等には、欠かせないアイテムです。
測定上の注意点 : 載せるサンプルの量が4μLと少ないため、乾燥した部屋では直ぐに蒸発して濃縮されます。素早く測定しましょう。
ThermoFisher
NanoDrop 超微量分光光度計および蛍光光度計
![[Lab-Equip] SDS-PAGE電気泳動システム – ID9509 [2020/02/16]](https://harikiri.diskstation.me/myblog/wp-content/uploads/2020/02/8F619952-4274-4AEC-A754-49D5FF23ECF9.jpeg)
硫酸ドデシルナトリウムを添加したポリアクリルアミド・ゲル・電気泳動は、タンパク質の純度を分析する最も一般的な方法です。40年前では、自作のゲルを1日かがりで作り、翌日に、さんプルをゲルに載せて、電圧を付加して泳動し、その夕方から染色を一晩し、翌日から脱色するという工程を行なっていました。パイオの世界では、これらの作業もプレキャスト・ゲル(既製品)が登場することで、研究活動の姿は、一変しました。当時の電気泳動槽は、現在の10cm四方のプレキャスト・ゲルよりも2倍よりももっと大きなものもあって、ガラス製で価格も40~50万円と高価でした。
電気泳動を行うには、直流のパワーサプライも必要です。
タンパク質ゲル電気泳動槽システム, ThermoFisher
https://www.thermofisher.com/jp/ja/home/life-science/protein-biology/protein-gel-electrophoresis/protein-gel-electrophoresis-chamber-systems.html
![[Bio-Lab] Slide-A-Lyzer™ Dialysis Cassette – タンパク質サンプルのバッファー置換 – 昔は、透析チューブを使っていたが今はバカチョン – ID8580 [2020/09/16]](https://harikiri.diskstation.me/myblog/wp-content/uploads/2020/02/C1B29D5C-22EE-45CB-A3A6-212E91972320.jpeg)
ラボスケール用の透析用膜キットです。昔は、ロールの透析チューブを使っていました。必要な長さにハサミで切り、熱湯で保護剤のグリセリンを洗い流して、精製水で洗って、片方を結び閉じます。その後、サンプルをロートで、透析チューブに流し入れます。最後に、少し上に空気を入れた状態で、上を結び閉じます。その後、透析バッファーの入ったビーカーに投入して撹拌します。
この準備を端折りたいのであれば、この「Slide-A-Lyzer」を使うことです。
現在では、Slide-A-Lyzerが簡単な操作で透析が可能なため、良く使われます。
昔は透析チューブを使っていた
旧研究者は、ロールになった透析膜を必要な長さにはさみで切って、煮沸して保存剤であるグリセロールを取り除くと共に、柔らかくした後、精製水でよくもく洗いして透析チューブにして使用していました。透析チューブは、まず、一方の端を一回結びします。もう一方から、ロートを使ってサンプルを流し込みます。その後、その一方の端を少し空気を入れて結び、透析チューブとします。
バッファー交換とは、1,000倍希釈を目標とします。
ラボでは、(1)透析チューブやSlide-A-Lyzerを使ってバッファー交換することが多いですが、量が多かったり、タンパク質濃度を高めたかったりする場合、(2)クロスフローろ過膜(TFF)システムを使います。以下、比較してみましょう。
| 透析チューブ / Side-A-Lyzer | TFF System |
| ラボ用として簡単に透析が実施できる | システム構築が必要 |
| 元のサンプルの液量より増える | 濃縮が可能 |
| 透析用バッファーの量が多い | 透析用バッファーの量は、理論上、サンプルの8倍量で1,000倍希釈を達成できる |
| 膜の内外の透過が平衡状態となったときが、最終的な希釈率となるが、その平衡状態を知る方法は、サンプリングして、電動度などを測定するしかない | ろ過された液量から、簡単に希釈率を計算できる |
Slide-A-Lyzer™ Dialysis Cassette
https://www.thermofisher.com/jp/ja/home/life-science/protein-biology/protein-purification-isolation/protein-dialysis-desalting-concentration/dialysis-products/slide-a-lyzer-dialysis-cassettes.html
2020/02/04 HARIKIRI(MR) 2021/03/27 TFFシステムとの比較
![[Bio-Process] 除菌ろ過 (Sterile filtration) [2020/02/01]](https://harikiri.diskstation.me/myblog/wp-content/uploads/2020/02/D6B55360-1470-4E1F-9BF6-766B9F1713C9.jpeg)
得られたサンプルは、in vitro, in vivo試験で評価するために、除菌ろ過を行い、無菌状態にする
マイレクス（Millex）-HV フィルター, 0.45 µm, PVDF, 33 mm, ガンマ線滅菌済本製品は医療機器あるいは体外診断用医薬品ではありません。
https://www.merckmillipore.com/JP/ja/product/Millex-HV-Syringe-Filter-Unit-0.45m-PVDF-33mm-gamma-sterilized,MM_NF-SLHV033RS
![[Bio-Process] UF/DF Process [2020/09/30]](https://harikiri.diskstation.me/myblog/wp-content/uploads/2019/08/3D975F1E-522B-412B-B4C5-4189E41A7349.jpeg)
目的物資の安定な電気伝導度とpHに組成を変更することを目的とします。
ラボシステムとして、Sartorius StedimのVIVA FLOW 200を以下に示します。
Fisher Scientific –
https://www.fishersci.fi/fi/en/catalog/search/products?keyword=Sartorius+VivaFlow+200
![[Bio-Process] Polishing Process of mAb purification [2020/02/01]](https://harikiri.diskstation.me/myblog/wp-content/uploads/2020/02/9A181A99-C7CF-41FD-873B-83114F421DB0.jpg)
GE Healthcare HiPrep™ IEX FF 16/10 Columns, Fisher Scientific –
https://www.fishersci.fi/shop/products/ge-healthcare-hiprep-iex-ff-16-10-columns-2/10607855
![[Bio-Process] Low pH Virus Inactivation](https://harikiri.diskstation.me/myblog/wp-content/uploads/2020/02/B711E693-5E12-412A-9794-0550E6526060.jpeg)
低pH処理によるウイルス不活化は、pHの調整後は静的な保管条件が維持されるため、基本的にはプロセス容器中で実施される。CMOなどのスケールが小さい製造では、シングルユース製品であるFlex bugなどが使用できる。
Thermo Scientific™ Productainer™ BPC Bag with 3 Ports
https://www.fishersci.com/shop/products/productainer-bpc-bag-3-ports/p-4521461
2020/02/01, Mr. Harikiri
2020/04/24, 追記 (関連記事)
2021/10/30, 文言整備
![[Bio-Lab] Pipette – ID9523 [2020/02/16]](https://harikiri.diskstation.me/myblog/wp-content/uploads/2020/02/C09B6659-759C-4038-B4EE-95D05C8D6AF9.jpeg)
