Bio-Equipment-Harvest
Zeta Plus
細胞と培養上清を分離する工程である
スモールスケールでは、ろ過膜によりハーベストを実施する。5000L以上の培養スケールでは、連続遠心機が使用される
Zeta PlusTM シングルユース吸着デプスフィルター製品 – 3M
https://multimedia.3m.com/mws/media/983784O/cun-p15.pdf
関連
編集履歴 2020/03/06 Mr.HARIKIRI
タグ: culture
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![[Bio-Equip] Zeta Plus – 培養上の清澄ろ過 – 3M – ID11472 [2020/03/06]](data:image/png;base64,iVBORw0KGgoAAAANSUhEUgAAAkcAAAKpAQAAAACedrWoAAAAAnRSTlMAAHaTzTgAAABISURBVHja7cExAQAAAMKg9U9tCU+gAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAgL8BxNoAAfUFCkUAAAAASUVORK5CYII=)
[Bio-Equip] Zeta Plus – 培養上の清澄ろ過 – 3M – ID11472 [2020/03/06]
3M Zeta Plus -
![[Bio-Equip] Flexsafe RM – Wave Bioreactor シングルユースバッグ – Sartorius – ID11421](data:image/png;base64,iVBORw0KGgoAAAANSUhEUgAAAUoAAAC6AQAAAADgtzkFAAAAAnRSTlMAAHaTzTgAAAAeSURBVFjD7cEBAQAAAIIg/69uSEABAAAAAAAAwLsBHz4AAS3P860AAAAASUVORK5CYII=)
[Bio-Equip] Flexsafe RM – Wave Bioreactor シングルユースバッグ – Sartorius – ID11421
Flexsafe(R) RM
Wave培養用シングルユースバッグ
Flexsafe® RM
Disposable Cultivation Chambers for Rocking Motion BioreactorsFlexsafe® RM
https://www.sartorius.com/resource/blob/58506/96438c46c1d8d0cfc897509d0c7941b9/data-flexsafe-rm-sbt2013-e-data.pdf
Disposable Cultivation Chambers for Rocking Motion BioreactorsBiostat® RM and Flexsafe® RM for Seed Production and Small-scale Protein Supply
http://sartorius-sd.com.ua/files/Bioreactors/onetime_bioreactors/Broch_Biostat-RM.pdfAllegro™ MVP Single-Use System
https://shop.pall.com/us/en/biotech/single-use-solutions/automated-systems/allegro-mvp-single-use-system-zidhlieud7s編集履歴 2020/03/06 Mr.HARIKIRI
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![[Bio-Equip] Erlenmeyer Flask – 初期培養用フラスコ – ID11424 [2020/03/06]](data:image/png;base64,iVBORw0KGgoAAAANSUhEUgAAAI8AAAD6AQAAAACw9ylMAAAAAnRSTlMAAHaTzTgAAAAbSURBVFjD7cExAQAAAMKg9U9tCy+gAAAAAOBlEo4AAfz/aWMAAAAASUVORK5CYII=)
[Bio-Equip] Erlenmeyer Flask – 初期培養用フラスコ – ID11424 [2020/03/06]
フラスコ培養
セル・バンクの融解から始める初期の培養に使用
編集履歴 2020/03/06 Mr.HARIKIRI
Erlenmeyer Flask – IWAKI
http://www.iwakiglassindonesia.com/jp/product/erlenmeyer-flask-glass-stopper -
![[Bio-Equip] Vi-CELL XR – 性細胞数を測定 – BeckMan Coulter – ID11412 [2020/03/06]](data:image/png;base64,iVBORw0KGgoAAAANSUhEUgAAAlgAAAKbAQAAAAABYclrAAAAAnRSTlMAAHaTzTgAAABISURBVHja7cExAQAAAMKg9U9tDB+gAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAH4GxgQAAU/usN0AAAAASUVORK5CYII=)
[Bio-Equip] Vi-CELL XR – 性細胞数を測定 – BeckMan Coulter – ID11412 [2020/03/06]
Vi-CELL XR
トリパンプルー染色法を用いた培養細胞の生死細胞を自動的に分析してする自動装置です。サンプルをカップに入れるだけで細胞の染色から解析データの印刷までを全自動で行います。
従来の光学顕微鏡と血球計算板を用いる方法を自動化する装置であり、同時に10サンプルの測定が可能です。
Supplier
BeckMan-Coulter
測定項目
- トータル細胞数
- 細胞濃度
- サイズ分布
- 細胞の生死判定
- 生存率
- 生細胞濃度
機能
- アクセス制限
- 監査城跡
- 21 CFR Part 11対応
- 品質確認(PQ)
生死細胞オートアナライザー
https://ls.beckmancoulter.co.jp/products/cell-counting/vi-cell
Vi-CELL XR – BECKMAN COULTER編集履歴 2020/03/06 Mr.HARIKIRI
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![[Bio-Equip] Pod Filter System – 培養液清澄ろ過 – Millipore – ID118625 [2020/03/03]](data:image/png;base64,iVBORw0KGgoAAAANSUhEUgAAAu4AAAMAAQAAAABTX98hAAAAAnRSTlMAAHaTzTgAAABdSURBVHja7cEBDQAAAMKg909tDwcUAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAPwYHQ8AAboyh58AAAAASUVORK5CYII=)
[Bio-Equip] Pod Filter System – 培養液清澄ろ過 – Millipore – ID118625 [2020/03/03]
Bio-Equipment-Harvest
Millipede Pod filter System
Harvestに使用されるMillipreのろ過システム
Millipore Millistack+ POD Millipore, pod filter system
https://www.merckmillipore.com/Web-JP-Site/ja_JP/-/JPY/ShowDocument-Pronet?id=201306.13804編集履歴 2020/03/03 Mr.HARIKIRI
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![[Bio-Equip] Xuri Cell Expansion System W25 – △ID8624 [2020/02/05]](data:image/png;base64,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)
[Bio-Equip] Xuri Cell Expansion System W25 – △ID8624 [2020/02/05]
Xuri Cell Expansion System W25
Cytiva社製のロッキング方式の細胞の拡大培養システム
Xuri Cell Expansion System W25, GE Healthcare –
https://www.gelifesciences.co.jp/catalog/37456.html -
![[Bio-Process] 清澄ろ過/Harvest – 必要な膜面積の求め方 – ID8347 [2020/06/25]](data:image/png;base64,iVBORw0KGgoAAAANSUhEUgAAAwAAAAIIAQAAAADx3rT6AAAAAnRSTlMAAHaTzTgAAABISURBVHja7cExAQAAAMKg9U9tDB+gAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAgLcBxQgAAViQn8kAAAAASUVORK5CYII=)
[Bio-Process] 清澄ろ過/Harvest – 必要な膜面積の求め方 – ID8347 [2020/06/25]
Bio-Process-Harvest
ハーベスとは、細胞培養が終了して、次の工程であるクロマト工程にロードするために行う清澄化工程のことです。
昔は、フィルター性能が低かったら異から、連続遠心機が使われていましたが、現在では、フィルターろ過によるハーベストが主流になりました。その別な要因としては、培養スケールが小さくなってきたことも一因です。
処理目的の溶液に対して、ろ過に必要なフィルターの膜面積を求める方法には、3つあります。
- Vmax : 単位時間あたりの処理量で判断
- Pmax : 膜の耐圧で判断
- Tmax : 濁りの除去程度で判断
Method Particle retention measurement
(X-Y dimension)Constant Endopoint Pmax Size Exclusion is primary method Throughput – Pressure Flow rate Maximum Pressure Tmax Adsorption is general Throughput – Tubidity Flow rate Filtrate Quality Vmax Size Exclusion is primary mechanism Throughput – Flow rate Pressure Minimum Flow rate Filter Sizing Methods
https://www.dcvmn.org/IMG/pdf/5.application_note-_filter_sizing_methods.pdfPall
日本ポール
https://www.pall.jp抗体
スモールスケールでは、ろ過膜により実施される
rAAV
rAAVの精製の場合で、細胞を破砕する必要がある場合は、Extraction Processを実施した後、Harvest Processを実施する。
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![[Bio-Process] バイオロジクスにおける本培養の概要/Production – [2021/10/30]](data:image/png;base64,iVBORw0KGgoAAAANSUhEUgAAAOEAAADgAQAAAADdlDxyAAAAAnRSTlMAAHaTzTgAAAAdSURBVFjD7cExAQAAAMKg9U/taQmgAAAAAAAA4AYaQAABAu1AiAAAAABJRU5ErkJggg==)
[Bio-Process] バイオロジクスにおける本培養の概要/Production – [2021/10/30]
-ID17487
Production Culture
抗体の場合、一般に2週間の本培養が実施される。ウイルスベクターの場合、培養スケールに応じた拡大培養期間と、その後の3日間程度のプラスミドトランスフェクションが実施される
重要なことは、生産量が最大になるように培養条件が設定されていることである。次に、培養の終了と判断できる条件も設定されており、産生されたプロダクトが分解などの劣化が無いように設定される。
抗体医薬の場合
- 抗体産生細胞のプロダクション培養
- 殆どの抗体の場合、CHO細胞が使用される
- 仕込み培地
- フィード培地
- エアー、酸素、窒素、二酸化炭素
- 微小金属 (Trace Metal)
- アミノ酸
- グロースホルモン
- 温度
- pH
- 攪拌
- 消泡剤
- Plutonic F-68 (細胞保護剤)
- プロダクション培養(本培養)の期間は最長でも15日
- 抗体産生量の測定(Protein Aカラム-HPLC)
rAAVの場合
- 原材料としてのプラスミド製造 (宿主細胞: E.coli)
- rAAV製造 (宿主細胞: 昆虫細胞、HEK細胞、CHO細胞などの培養
- 仕込み培地
- フィード培地
- 酸素
- 温度 (37℃)
- pH
- 攪拌
- 消泡剤
- プラスミドのトランスフェクション(24~72時間)
- ポリエチレンイミン
- カルシウム
- rAAV産生量の測定 (better : droplet digital PCR(ddPCR) > qPCR
カルタヘナ対応 (当局対応)
微生物 (E.coliなど)を使用する場合、カルタヘナ議定書に調印している国では(日本など)は、カルタヘナ法に関わる当局への申請が必要となる。
二種申請
申請には、以下の2つのタイミングがある
- Plasmid産生株E.coliバンクの製造開始前
- PlasmidのGMP製造開始前
Xcellarex, data sheet –
https://www.gelifesciences.co.jp/catalog/pdf/xdr-datasheet.pdfGILSP対応
具体的には作業する部屋の拡散防止措置に関する物理的・運用的な対応です。ヘパフィルター設置などの排気処理、不活化処理、など。
（参考）GILSPとは
GILSPとは、Good Industrial Large-Scale Practice（優良工業製造規範）の略で、1986年のOECD理事会勧告「組換えＤＮＡ技術の安全性の考察」に示された概念に基づいています(経済産業省より)。GILSPリスト – 経済産業省 –
遺伝子組換え生物等の第二種使用等に当たっては、主務省令で執るべき拡散防止措置が定められている場合には当該拡散防止措置を執り（法第十二条）、そうでない場合は、あらかじめ主務大臣の確認を受けた拡散防止措置を執らなければならない（法第１３条第１項）旨定められています。
https://www.meti.go.jp/policy/mono_info_service/mono/bio/cartagena/detailed_info/gilsp-list.html編集履歴
2020/02/01, Mr.HARIKIRI 2021/01/02,追記(GILSPについて)
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![[Bio-Process] 拡大培養/Subculture – ID9342 [2020/02/01]](data:image/png;base64,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)
[Bio-Process] 拡大培養/Subculture – ID9342 [2020/02/01]
拡大培養に使用する機器、装置
WAVE BIOREACTOR
Waveシリーズは、ロッキング方式で撹拌する培養装置です。細胞のセルバンクの融解からフラスコの拡大培養を開始して、プロダクション培養に入るまでの拡大培養に用いられる500L程度までの培養スケールが可能です。
Cytiva社のプロモーション・ビデオ
スモール・スケールから実製造業スケールまで
WAVE BIOREACTOR, GE
https://www.gelifesciences.co.jp/catalog/1278.html編集履歴 2020/02/01 Mr.Harikiri
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![[Bio-Process] 細胞の凍結融解から拡大培養の開始 – フラスコ培養/Inoculum – △ID9636 [2020/02/01]](data:image/png;base64,iVBORw0KGgoAAAANSUhEUgAAAwAAAAGsAQAAAABCu/2fAAAAAnRSTlMAAHaTzTgAAAA+SURBVHja7cEBAQAAAIIg/69uSEABAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA/BiiLAABdqzL1wAAAABJRU5ErkJggg==)
[Bio-Process] 細胞の凍結融解から拡大培養の開始 – フラスコ培養/Inoculum – △ID9636 [2020/02/01]
Bio-Process-Inoculum
- 凍結保管セルバンクの融解とフラスコ培養
液体窒素から取り出し融解したCell bankを、スモールスケールのフラスコ培養により培養を開始するステージです。
フラスコ Sci-Tech
回転方向、スピードとインターバルをプログラム制御- WAVE BIOREACORによる拡大培養
フラスコ培養の次のスケールは、WAVE BIOREACTORで拡大培養を続けます。
- Production Culture
その後、Production Cultureを2週間行われ、Harvest工程へ続きます。
![[Bio-Equip] Flexsafe RM – Wave Bioreactor シングルユースバッグ – Sartorius – ID11421](https://harikiri.diskstation.me/myblog/wp-content/uploads/2020/03/DF8E3C47-632D-4D53-BCE5-AA22C9B21FB9.jpeg)
![[Bio-Equip] Erlenmeyer Flask – 初期培養用フラスコ – ID11424 [2020/03/06]](https://harikiri.diskstation.me/myblog/wp-content/uploads/2020/03/EE921D3A-7196-41DE-91E3-860C823C8122-e1583504618956.jpeg)
![[Bio-Equip] Vi-CELL XR – 性細胞数を測定 – BeckMan Coulter – ID11412 [2020/03/06]](https://harikiri.diskstation.me/myblog/wp-content/uploads/2020/03/C9AE8E80-DDA2-4227-B1CE-81C9548F6E55.png)
![[Bio-Equip] Pod Filter System – 培養液清澄ろ過 – Millipore – ID118625 [2020/03/03]](https://harikiri.diskstation.me/myblog/wp-content/uploads/2020/02/4664DC88-21DA-4F70-9AA5-89B18A47C79E.jpeg)
![[Bio-Equip] Xuri Cell Expansion System W25 – △ID8624 [2020/02/05]](https://harikiri.diskstation.me/myblog/wp-content/uploads/2020/02/D20A0650-FB63-4787-8005-B1ED0CE80D76.jpeg)
![[Bio-Process] 清澄ろ過/Harvest – 必要な膜面積の求め方 – ID8347 [2020/06/25]](https://harikiri.diskstation.me/myblog/wp-content/uploads/2020/02/632CB1CB-99EF-4478-BF3C-871597F219D3.jpeg)
![[Bio-Process] バイオロジクスにおける本培養の概要/Production – [2021/10/30]](https://harikiri.diskstation.me/myblog/wp-content/uploads/2020/02/1FFAFF6B-D491-4222-9DEB-5FCA4B78F306.jpeg)
![[Bio-Process] 拡大培養/Subculture – ID9342 [2020/02/01]](https://harikiri.diskstation.me/myblog/wp-content/uploads/2020/02/3B29C7E1-7FDE-475E-80FE-F0617E17B608.jpeg)
![[Bio-Process] 細胞の凍結融解から拡大培養の開始 – フラスコ培養/Inoculum – △ID9636 [2020/02/01]](https://harikiri.diskstation.me/myblog/wp-content/uploads/2020/02/1E32B8E6-34CA-4492-A565-21B38BE3E8DB.jpeg)