カテゴリー: BIOLOGICS

[Gene Therapy] 過去に日本でも実施された遺伝子治療臨床研究( まとめ) [2020/06/15]

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日本の遺伝子治療研究の歴史

1995年から2006年までの間に、21の臨床研究が行われています。これらの研究があってこその現在の遺伝子治療の治験があると思います。

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2020/0615はりきり(Mr)

実施承認年	実施施設(病院・企業)	対象疾患	導入遺伝子	ベクター	実施症例数(予定症例数)	治験
1995	北海道大学医学部附属病院	アデノシンデアミナーゼ(ADA)欠損症[免疫不全症]	ADA	レトロウイルスベクター/ex vivo (患者T細胞)	1[終了]	–
1997	ミドリ十字	ヒト免疫不全ウイルス(HIV)感染症	HIV env/rev	レトロウイルスベクター/in vivo (筋注)	0(4) [開発前中止]	◯
1998	東京大学医科学研究所附属病院	腎癌	顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)	レトロウイルスベクター/ex vivo (患者腎癌細胞)	4(6) [終了]	–
1998	岡山大学病院/RPRジェンセン	非小細胞肺がん	正常型p53	アデノウイルスベクター/in vivo (ガン組織局所投与)	9[終了](15)	治験→臨床研究
2000	東京医科大学病院/RPRジェンセル	同上	同上	同上	3[終了]	同上
2000	東北大学病院/RPRジェンセル	同上	同上	同上	2[終了]	同上
2000	東京慈恵会医科大学附属病院	同上	同上	同上	1[終了]	同上
2000	名古屋大学医学部附属病院	悪性グリオーマ	インターフェロンβ	静電がリポソーム/in vivo (ガン組織局所投与)	5(25)	–
2000	癌研究会附属病院/同癌化学療法センター	乳がん(大量化学療法施行時の骨髄抑制防止)	多剤耐性遺伝子MDRI	レトロウイルスベクター/ex vivo (患者造血幹細胞)	3(10)	–
2000	千葉大学医学部附属病院/RPRジェンセル	進行食道癌	正常p53	アデノウイルスベクター/in vivo (癌組織局所投与)	10(10) [終了}	◯
2000	岡山大学病院	前立腺がん	ヘルペスウイルスチミジンンキナーゼ(HSV-tk)	アデノウイルスベクター/in vivo (癌組織局所投与)	9(9)[終了]	–
2001	大阪大学医学部附属病院	閉塞性動脈硬化症/バージャー病	肝細胞増殖因子(HGF)	プラスミドベクター/in vivo (大腿部筋肉内投与)	22(22)[ 終了]	–
2002	筑波大学附属病院	際発生白血病[移植片対宿主病(GVHD)の重症化防止]	HSV-tk/低親和性神経成長因子受容体膜貫通領域及び細胞外領域(deltaLNGFR)	レトロウイルスベクター/in vivo (ドナー抹消血単核球)	8(10)	–
2002	東京大学医科学研究所富士区病院	神経芽腫	インターロイキン-2/リンフォタクチン	アデノウイルスベクター/in vivo (患者造血幹細胞)	0(6)	–
2002	北海道大学附属医学部病院	ADA欠損症	ADA	レトロウイルスベクター/in vivo (患者造血幹細胞)	2(4)	–
2002	東北大学病院	X連鎖重症複合免疫不全症(X-SCID)	サイトカイン共通受容体γc鎖	レトロウイルスベクター/in vivo (患者造血幹細胞)	自主的未実施(5)	–
2003	神戸大学医学部附属病院	前立腺癌	HSV-tk	アデノウイルスベクター/in vivo (癌組織局所投与)	6(6)(終了)	–
2003	信州大学医学部附属病院	悪性黒色腫	インターフェロンβ	正電荷リポソーム/in vivo (癌組織局所投与)	5(5)(終了)	–
2003	アンジェスMG	閉塞性動脈閉塞症/バージャー病	HGF	プラスミドベクター/in vivo (大腿部筋肉内投与)	41(終了)/9(終了)	◯/◯
2006	九州大学病院	閉塞性動脈硬化症/バージャー病	線維芽細胞増殖因子-2(FDF-2)	仙台ウイルスベクター/in vivo (大腿-下腿部筋肉内投与)	11(12)	–
2006	自治医科大学附属病院	進行性パーキンソン病	ヒト芳香族L-アミノ酸脱水素酵素(hAADC)	AAVベクター/in vivo (線条体内定位脳手術的注入)	6(6)[終了]	–

バイオ医薬品ハンドブック〜 Biologicsの製造から品質管理まで〜, 日本PDA製薬学会バイオウイルス委員会、2012, p.132

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2020/06/16 Mr.HARIKIRI

2020年6月16日

気になる企業 – PlasmidFactory – PlasmidのGMP製造受託 [2020/06/16]
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PlasmidFactory
PlasmidFactory is the leading contract manufacturer and service provider for plasmid and minicircleDNA.
PlasmidFactory site
https://plasmidfactory.com
Plasmid DNAをGMPで製造受託
```
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2020/06/16 Mr.HARIKIRI
```
2020年6月16日
気になる企業 – LONZA – 遺伝子治療薬の製造も含めたバイオロジクスCDMOとして投資を進め世界の需要に応える　[2021/05/29]
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LONZA
動向
Lonzaの投資状況から、世界の需要は更に膨らんでいることが、容易に伺えます。2021/5に、現行のバイオロジクス製品の製造サイトであるVispサイト、Portsmouthサイトについて、ビッグサイズ (20,000L)のBioreactorを備えた製造ファシリティーの追加投資、または整備に関する発表がありました。いずれも2~3年後には本格可能します。エネルギ効率を追求した最新のファシリティとなるようです^Ref2。
経営状況
- 2019の売り上げは、LONZA全体で約5,900億円
- そのうち、Pharma Biotech & Nutritionの売り上げは、約4,200億円 source
Single use bioreactorの製造体制
- 2023年には、現在、各地で整備されているsingle-use Bioreactorを使用した製造体制の連携したネットワーク体制を完了させる (Hayward (US), Slough (UK), Tuas (SG) and Visp (CH) )^Ref2
ウイルスベクター分野
https://pharma.lonza.com/offerings/cell-and-gene-therapies
- 20年以上の関連経験を持つ科学者チームによるプロセス設計
- 開発、規制当局へのCMCパッケージの申請サポート
- 2001年にAdenovirus Type 5の製造経験
- >120 プロセス開発(gene and gene therapy) source
- >50 ウイルスベクターのカスタマーへの提供実績
- ヒューストン施設でのフレキシブルな製造
Lonza GT
製造施設
Houston, TX, US
CVlinical Manufacturing, Commercial Manufacturing, Cell and Gene Manufacturing, Viral Vector Manufacturing
- 300,000ft2 (細胞及び遺伝子治療施設)
- モジュラー設計クリーンルーム
- 施設の拡張性 (single use system)
  - non-GMP: Max 250L suspension
  - cGMP: 50L to 2,000L suspension
  - AAV, Lentivirus, Adenovirus, 腫瘍溶解ウイルス(oncolytic viruses)
- テクノロジー
  - AAV製造
    HEK293 based transient transfection (独自)
    Hela cell-based producer cell lines
    baculovirus-based method
  - Lentivirus製造
    付着/浮遊
  - Adenovirus及び腫瘍溶解性ウイルス
フィスプ(CH)、ポーツマス(US)とチュアス(SG)
臨床及び商用生産の提供
- Visp (CH) : スイスのフィスプ
  - 6 x 20,000Lの新しい最新型の製造施設を650m CHFで建設(27,500 m²)すると発表。2024に稼働予定
- Portsmouth, NH, USA
  - Clinical Manufacturing, Commercial Manufacturing, Cell and Gene Manufacturing
  - 8 x 20,000L
- Tuas, Singapore
  - Production, Sales & Suport
Ref 2.
06 May 2021, Lonza Announces Expansion Plans for Next-Generation Mammalian Manufacturing Facilities in Visp (CH) and Portsmouth (US)
https://www.lonza.com/news/2021-05-06-07-02
ペアランド(US)とゲレーン (NL)
プロセス開発/分析開発、臨床用製造、商用製造
- Geleen, The Netherlands
  - Clinical Manufacturing, Commercial Manufacturing, Cell and Gene Manufacturing, Process Development, Analytical Development
  - 2017年にPharmaCell BV(2005年にBrightlands Maastricht Health Campusに細胞及び遺伝子治療と再生医療を目的に設立、2017年現在、6000m2のGMP施設と関連施設、過去7年間の実績)を買収source
- Pearland, TX, USA
編集履歴
```
2020/06/15 Mr.Harikir
2021/05/29,追記(Visp (6 x 20,000L追加)とPortsmouth (8 x 20,000L体制整備)の大規模製造サイトに更なる投資により顧客需要に応える)
```
2020年6月15日

[Bio-Edu] ウイルスベクターの比較 – AAV – Adenovirus – Lentivirus – by Vigene Biosciences社 [2020/6/15]

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Vigene Biosciences

Vigene Biosciencesは、AAVのパッケージングを受託しています。Vigene Biosciencesのサイトから、遺伝子治療のVectorとしてAAV, AdenorirusおよびLentivirusの比較があります。以下、ご紹介します。

Characteristic	AAV*1	Adenovirus	Lentivirus
Genome	4.8 kb (ssDNA)	36 kb (dsDNA)	9 kb (ssRNA)
Packaging Capacity	4.7 kb	7.5 kb	9 kb
Infection	Most dividing and non-dividing cells	same as left	same as left
Transduction Efficiency	Moderate	High	Moderate
Integration	Non-integrating	Non-integrating	Integrating
Expression	Transient or stable	Transient	Stable
Immunogenicity	Very Low	High	Low
Biosafety	BSL-1	BSL-2	BSL-2

https://www.vigenebio.com/aav-packaging/ by Vigene社

*1: AAVはAAVS1遺伝子座にインテグレートしますが、rAAV vectorでは、2つの遺伝子を除去しているためインテグレートされません．又、エピソーム(episomal)のままであり、非分裂細胞(non-dviding cell)内に長期間維持される可能性があります。

AAVのtransfection戦略

トリプル・トランスフェクション戦略 (co-transfecting)

GOI plasmin
rep/cap plasmid
Helper plasmid (Adenovirus由来, for genes replication)

Cre-dependent trans-splicing approach

reconstituted gene expression from two independent recombinant AAV vectors, however this efficiency is ~20% than single single method.

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2020/06/15 Mr.HARIKIRI

2020年6月15日

[Bio-Equip] 3M™ Emphaze™ AEX HP デプスフィルター・クロマトグラフィー[2020/07/23]
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3M Emphaze AEX HP Depth Filter
3M™ Emphaze™ AEX HP デプスフィルター・クロマトグラフィー
https://www.3mcompany.jp/3M/ja_JP/company-jp/all-3m-products/~/3M-Emphaze -AEX-HP-デプスフィルター-クロマトグラフィー/?N=5002385+8711017+3291555558&rt=rud
- 培養液の清澄化、純度・濃度および回収を最大化します
- 除菌メンブレンフィルターの縮小化が可能です
  - デブリス除去性能が高いため、ろ過液の清澄度が高く、後段の除菌フィルターの大きさを削減可能です
- 後段のウイルス不活性化を削減します
  - イオン交換体(AEX)基材が使われているため、負に帯電しているウイルスが吸着されます
- 後段AEX工程の縮小化が可能です
  - イオン交換体(AEX)基材が使われているため、Host Cell Proteinなどの不純物も吸着除去により低減化が可能であるためです。
考慮点
一般的なDepth FilterからEmphazeに変更する場合、AEX機能による不純物除去効果の高さを良い意味で考慮する必要があります。後段以降の考慮プロセスは以下の通りです。
- 除菌フィルター工程における圧力変化、膜サイズの低減化
- 抗体医薬の場合、Protein Aカラムクロマトグラフィー工程におけるクロマトパターンの変化
以上
```
編集情報
ID 17666
2020/06/16 Mr.はりきり
2020/07/23 追記 (説明追加、考慮点)
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2020年6月15日
気になる企業 – 3M – バイオロジクスの製造におけるMembrane製品 [2020/06/15]
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3M
Filters for Harvestの清澄ろ過に強い
- Innovative Biopharma Solutions : source(2013)
  - Air Filtration
  - Vent Air Filtration
  - In Process Storage (biocontainer)
  - Filtration of Media Components
  - Filtration of Nutrients/Buffers
  - Automated Integrity Tester For Housings And Connections
  - Surface Cleanliness Monitoring
2020年6月15日
気になる企業 – WuXi Advanced Therapies – 遺伝子治療CDMO [2020/06/15]
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WuXi Advanced Therapies
WuXi社が有名なのは、抗体医薬CDMOであることです。別会社ですが、ここ数年の世界の動きの中で、WuXi社も遺伝子治療開発のCDMOも本格稼働しています。遺伝子治療には、ウイルスベクターが世界では盛んに開発が行われています。
ホームページ
WuXi Advanced Therapies
アメリカのペンシルペディア州フィラデルファイには、すでに4カ所のサイト、中国の上海にGMP施設が1カ所が近くエスタブリッシュされます。
- LI1 (League Island 1)
  - HQ/Early Phase Clinical Manufacturing and Testing
  - Establish 2004
  - 82,000 ft2
- LI2 (League Island 2)
  - Late Phase/Commercial Viral Manufacturing and Testing
  - Establish 2016
  - 150,000 ft2
- CC3 (Commerce Center 3)
  - Non-Viral Cell Therapy Manufacturing
  - Establish 2015
  - 55,000 ft2
- Center for Analytical Chemistry Solutions
  - Coming Soon
- New GMP facilities
  - Shanghai and WuXi City
USサイト
China GMP facilities
上海にもGMP製造設備がある．
```
編集履歴
2020/06/15 Harikiri(Mr)
2024/01/02 文言整備
```
2020年6月15日
[用語] バキュロウイルス
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バキュロウイルスには2つのタイプがある
- AcNPV : Sf9等の昆虫細胞にのみ感染
- BmNPV : カイコのみに感染する。これから作ったベクターをバクミド・ベクター (BACmid vector)という
  - BACmid システム: BACmid vectorと目的タンパク質をコードするベクターを大腸菌に入れると、BACmidに目的タンパク質をコードする遺伝子が挿入される
  - BACmidは、昆虫細胞Sf9へのインフェクションに使用できる
2020年6月15日
[用語] ADP; アデノシン2リン酸
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- アデノシン2リン酸．ATP → ADP → AMPと脱リン酸化する
- ADPは、受容体(P2Y₁, P2Y₁₂ )が知られている
- 血小板のP2Y₁, P2Y₁₂ に結合すると
  - 形態変化
  - 血小板凝集
  - 荒木斬酸、トロンボキサンA2(TXA₂)の放出
- 血管内皮細胞
  - 表面に発現しているecto-ADPase (CD3, ecto-ATP diphosphohydrolase, ecto-apyrase)は、ADP分解
池田康夫、血小板生物学、丸山征郎、メディカルレビュー社、2004
大森司、血小板と臨床検査、血栓止血誌 19:456-458, 2008
2020年6月14日
[Bio-Equip] キャピラリー電気泳動システム – PA 800 Plus – SDS-PAGEおよびIEX分析
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CESI 8000 Plus
抗体医薬を製造して品質を分析しますが、その分析項目には、電気泳動分析が含まれます。数年前では、プリキャスト・ゲルを使用した分析です。
キャピラリー電気泳動は、オートサンプラーによる自動のサンプル注入により短時間で再現性良く測定できます。因みに、精製検討のサンプルを分析するには不向きなので、研究者は使用しません。
CESI 8000 Plusは、キャピラー電気泳動システムです。
以上
キャピラリー電気泳動システムPA 800 Plus
https://sciex.jp/products/capillary-electrophoresis/pa-800-plus-pharmaceutical-analysis-system
バイオ医薬品のキャピラリーSDSゲル電気泳動分析
https://sciex.jp/therapeutic-protein-characterization/sds-mw-analysis
```
編集履歴
2020/03/08 Mr.HARIKIRI
```
2020年6月8日