微生物限度試験の具体例
- 微生物限度試験や無菌試験に用いる培地は、**適格性確認（Growth Promotion Test）**を行って、有効な培地であることを確認する必要があります。
- この試験では、所定の微生物を少数（通常≦100 CFU）添加して、適切に増殖するかを確認します。
試験菌の調製 :
(参照: 日本薬局方（第十八改正）「4.05 微生物限度試験」および関連のガイダンス（例：JP解説書、USP、ICH Q6A等）
- マスターシードロットから継代数5回を超えないこと(シードロットシステム)
- 細菌及び真菌の各試験菌は，表中に記載の自要件で個別に培養し試験する．
- 試験菌懸濁液の調製には，ペプトン食塩緩衝液 pH7.0，又はリン酸解消液 pH7.2を用いる．
- カビの一種にはPolysorbate 80を0.05%加えても良い．
- 懸濁液は2時間以内，又は2～8℃で24時間以内に用いる．
- など．
「日本薬局方 一般試験法4.05 微生物限度試験」の概要
Ⅰ.非無菌製品の微生物学的試験：生菌数試験Ⅰ. 非無菌製品の微生物学的試験：生菌数試験
- **TAMC（Total Aerobic Microbial Count）**は、総好気性微生物数のことであり、製品中に存在する好気性の生菌（細菌や一部真菌）を測定するための指標です。
- **TYMC（Total Yeasts and Molds Count）**は、総酵母・カビ数のことで、製品中に含まれる真菌（酵母およびカビ）の生菌数を測定します。
- これらは、製品の種類や投与経路に応じて、許容される限度内であることが求められます。
Ⅱ. 非無菌製品の微生物学的試験：特定微生物試験
非無菌製品には、製品の性質や使用目的に応じて、以下の特定微生物の存在が検査されることがあります。
- 大腸菌（Escherichia coli）
- サルモネラ属菌（Salmonella spp.）
- 緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）
- 黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）
- 胆汁酸塩添加培地で選択される腸内細菌（Enterobacteriaceae）
※上記は製品のカテゴリー（経口用、経皮用、小児用など）によって検査の要否が異なります。
【補足：日本薬局方で通常対象とならない微生物】
以下の微生物は、日本薬局方における微生物限度試験の特定微生物には含まれていません（他の国の薬局方や食品分野などでは対象となることがあります）：
リステリア・モノサイトゲネス（Listeria monocytogenes）
クロストリジウム属（Clostridium spp.）
カンジダ・アルビカンス（Candida albicans）
培地の種類 :
日本薬局方「4.05 微生物限度試験」で使用される主な培地一覧
【1】生菌数試験（TAMC・TYMC）
| 用途 | 培地名 | 説明 |
|---|---|---|
| TAMC（Total Aerobic Microbial Count） 総好気性微生物数 | Soybean-Casein Digest Agar（SCDA） （大豆－カゼイン消化寒天培地） | 好気性細菌の増殖に使用される汎用培地 |
| TYMC（Total Yeasts and Molds Count） 総酵母・カビ数 | Sabouraud Dextrose Agar（SDA） （サブロー・デキストロース寒天培地） | 酵母・カビなどの真菌検出用 |
【2】特定微生物試験（例：大腸菌、サルモネラなど）
| 微生物名 | 使用培地（例） | 補足 |
|---|---|---|
| 大腸菌（Escherichia coli） | MacConkey Agar または Lactose Broth（乳糖ブロス） | 発酵試験・選択分離に使用 |
| サルモネラ属菌（Salmonella spp.） | Selenite Cystine Broth Xylose Lysine Deoxycholate (XLD) Agar | サルモネラ選択培地 |
| 黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus） | Mannitol Salt Agar | 耐塩性・マンニトール分解能を利用 |
| 緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa） | Cetrimide Agar | 選択培地（緑色の色素産生） |
| 胆汁酸塩添加腸内細菌（Enterobacteriaceae） | Violet Red Bile Glucose Agar（VRBGA） | 胆汁塩に耐性を持つ腸内細菌群の検出 |
| クロストリジウム（参考） | ※日局では規定なし（食品向けにReinforced Clostridial Mediumなどが使用されることあり） | — |
【3】その他補助培地（特定微生物試験で使用）
| 培地名 | 用途例 |
|---|---|
| Tryptic Soy Broth (TSB) | 一般的な増菌用液体培地 |
| Buffered Sodium Chloride Peptone Solution | 試料の懸濁・希釈用 |
| Bile Salt Broth | 胆汁酸塩耐性菌の検出（例：Enterobacteriaceae） |
備考
- 日局では「指定の培地を使え」と明記されている場合と、「適切な培地を使用すること」として自由度があるケースの両方があります。
- 特定微生物試験では、「増菌 → 選択培地で分離確認」という流れが一般的です。