培地の種類 :
日本薬局方「4.05 微生物限度試験」で使用される主な培地一覧
【1】生菌数試験（TAMC・TYMC）
| 用途 | 培地名 | 説明 |
|---|---|---|
| TAMC（Total Aerobic Microbial Count） 総好気性微生物数 | Soybean-Casein Digest Agar（SCDA） （大豆－カゼイン消化寒天培地） | 好気性細菌の増殖に使用される汎用培地 |
| TYMC（Total Yeasts and Molds Count） 総酵母・カビ数 | Sabouraud Dextrose Agar（SDA） （サブロー・デキストロース寒天培地） | 酵母・カビなどの真菌検出用 |
【2】特定微生物試験（例：大腸菌、サルモネラなど）
| 微生物名 | 使用培地（例） | 補足 |
|---|---|---|
| 大腸菌（Escherichia coli） | MacConkey Agar または Lactose Broth（乳糖ブロス） | 発酵試験・選択分離に使用 |
| サルモネラ属菌（Salmonella spp.） | Selenite Cystine Broth Xylose Lysine Deoxycholate (XLD) Agar | サルモネラ選択培地 |
| 黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus） | Mannitol Salt Agar | 耐塩性・マンニトール分解能を利用 |
| 緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa） | Cetrimide Agar | 選択培地（緑色の色素産生） |
| 胆汁酸塩添加腸内細菌（Enterobacteriaceae） | Violet Red Bile Glucose Agar（VRBGA） | 胆汁塩に耐性を持つ腸内細菌群の検出 |
| クロストリジウム（参考） | ※日局では規定なし（食品向けにReinforced Clostridial Mediumなどが使用されることあり） | — |
【3】その他補助培地（特定微生物試験で使用）
| 培地名 | 用途例 |
|---|---|
| Tryptic Soy Broth (TSB) | 一般的な増菌用液体培地 |
| Buffered Sodium Chloride Peptone Solution | 試料の懸濁・希釈用 |
| Bile Salt Broth | 胆汁酸塩耐性菌の検出（例：Enterobacteriaceae） |
備考
- 日局では「指定の培地を使え」と明記されている場合と、「適切な培地を使用すること」として自由度があるケースの両方があります。
- 特定微生物試験では、「増菌 → 選択培地で分離確認」という流れが一般的です。
培地の調達先
無菌試験法の具体例1(膜ろ過法)
「日本薬局方 一般試験法4.06 無菌試験法」の概要
Ⅰ. 無菌製品の微生物学的試験：無菌試験の概要
- 無菌試験（Sterility Test）は、注射剤、点眼剤、透析液などの無菌製品に対して実施される試験です。
- この試験の目的は、試験対象製品に生きた微生物が存在しないことを確認することです。
- 試験は、製品の滅菌法の妥当性を確認し、製品が汚染されていないことを保証するために行われます。
Ⅱ. 試験法の種類と実施方法
日本薬局方では、以下の2つの方法が規定されています：
1. 直接接種法（Direct Inoculation Method）
- 試料をそのまま滅菌培地に接種し、微生物の発育を観察する方法。
- 接種後、30～35℃の好気性細菌用培地（FTM）と20～25℃の真菌用培地（SCD）の両方で14日間培養します。
2. 膜ろ過法（Membrane Filtration Method）
- 液状製品に用いられる主な方法で、製品を滅菌膜でろ過し、膜上の微生物を2種類の培地に移して培養します。
- 濁度や着色などで直接接種が困難な製品にも適応可能です。
Ⅲ. 培地および培養条件
| 培地名 | 培養温度 | 培養日数 | 対象微生物の例 |
|---|---|---|---|
| FTM（Fluid Thioglycollate Medium） | 30～35℃ | 14日間 | 好気性および通性嫌気性細菌 |
| SCD（Soybean-Casein Digest Medium） | 20～25℃ | 14日間 | 真菌（酵母・カビ）など |
※ 両培地とも、事前に**培地の適格性試験（Growth Promotion Test）**を実施し、有効性を確認する必要があります。
Ⅳ. 試験の適用対象
無菌試験は、以下のような製品に義務付けられています：
- 注射剤（バイアル、アンプルなど）
- 点眼剤
- 透析液
- 一部の手術用洗浄剤や注入液
※製品ごとに試験法の選択（直接接種 vs 膜ろ過）は、その性状・使用目的に応じて判断されます。
Ⅴ. 注意点・補足
よって、製造工程の**無菌保証（例：滅菌バリデーション、環境管理、無菌操作）**と組み合わせて使用される必要があります。
無菌試験は、無菌性を完全に保証するものではなく、統計的確認手段とされています。
試験対象例：バイアル注射剤（液体）
使用する材料・培地
| 材料 | 目的 |
|---|---|
| 膜ろ過装置（0.45μm以下） | 試料中の微生物を捕集 |
| 流加チオグリコール酸培地（FTM） | 嫌気性菌の培養用（30±2℃・14日間） |
| 大豆-カゼイン消化物液体培地（TSB） | 好気性菌の培養用（20～25℃・14日間） |
| 陽性対照菌（性能確認用） | 培地の性能検証（例：S. aureus, C. sporogenes など） |
ステップ①：試料の準備とろ過
- 滅菌済みの膜ろ過装置を組み立てる。
- 試料（例：注射剤1本）を装置に通して膜フィルターに微生物を捕集。
- 捕集後、フィルターを滅菌ピンセットで2枚に分け、
- 1枚：FTMに入れる（嫌気性）
- 1枚：TSBに入れる（好気性）
ステップ②：培養
| 培地 | 培養条件 |
|---|---|
| FTM | 30 ± 2℃／14日間 |
| TSB | 20～25℃／14日間 |
両培地を別々のインキュベーターで管理。
培養中は、毎日または数日に一度**外観観察（濁り・沈殿など）**を行います。
ステップ③：判定
| 判定基準 | 内容 |
|---|---|
| 合格 | 培地が透明なまま・濁りなしであれば「無菌」 |
| 不合格 | 培地に濁りや微生物の発育兆候があれば「汚染あり」 |
まとめ：膜ろ過法の流れ
cssコピーする編集する[試料準備] → [滅菌ろ過] → [膜を培地に移す] → [14日間培養] → [発育有無を確認]