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Q : sartorius のcellcelectorによるsingle cell cloningの原理について　nanoplateの使用方法なども含めて説明して

Copilot : SartoriusのCellCelectorは、シングルセルクローニングのための高度な自動化システムです。このシステムは、細胞の選択、ピッキング、移植を効率的に行うために設計されています。以下に、CellCelectorの原理とナノプレートの使用方法について説明します。

CellCelectorの原理

1. スキャンと検出: CellCelectorは、明視野、位相差、蛍光のいずれかまたは併用でソースプレートをスキャンし、画像を取得します。これにより、目的の細胞やコロニーを検出します.
2. 解析と選択: 取得した画像を解析し、ユーザー定義の基準に基づいて目的の細胞やコロニーを検出します。検出された細胞は、画像ギャラリーでレビューされ、ランク付けされます.
3. ピッキング: 検出されたシングルセルやコロニーをピッキングします。ピッキングは、液体で緩衝した使い捨てガラスキャピラリーを使用して行われ、穏やかかつ正確に細胞を吸引します.
4. 移植と培養: ピッキングされた細胞は、デスティネーションプレートに移植され、さらに培養されます。これにより、クローン細胞株の生成が行われます.

ナノプレートの使用方法

1. ナノウェルアレイの準備: CellCelectorは、ナノウェルアレイを使用してシングルセルクローニングを行います。ナノウェルアレイは、1ウェルのチャンバースライドから6ウェルおよび24ウェルのプレートまでさまざまなフォーマットで提供されており、プレートあたり10万から数百万のナノウェルが使用されています.
2. 細胞のシーディング: ナノウェルアレイに細胞をシーディングし、各ナノウェルに1つの細胞が入るようにします。これにより、シングルセルクローニングが可能になります.
3. スフェロイド形成とスクリーニング: シーディングされた細胞は、ナノウェル内でスフェロイドを形成し、イメージングとスクリーニングが行われます。これにより、目的のクローンを選択することができます.
4. 移植と拡大: 選択されたクローンは、通常の細胞培養プレートに移植され、さらに拡大および分析が行われます.

CellCelectorは、シングルセルクローニングの効率を大幅に向上させるための強力なツールです。これにより、バイオ医薬品の製造や研究において高品質なクローン細胞株を迅速に生成することができます。

1. シングルセル・クローニング・バリデーション・レポート
   • 平均確立 : 99.7% (FDAの推奨事項に準拠)
2. 対象クローンの証明書
   • Top 4 Clone (RCBのDay0とDay1の画像)について提出

1. Sterility : Sterility by Direct Inoculation to EP/USP
2. Mycoplasma : Mycoplasma Culture Assay to EP/USP
3. Cell Line Identity : DNA Barcoding Assay for Cell Line Identity
4. Gene Copy Number : Determination of gene copy number by real time PCR
5. Transgene DNA Seq : Confirmation of sequence of transgene (coding region) by mRNA wequencing
6. Transgene DNA Seq : Confirmation of 5′ and 3′ flanking regions of transgenen by DNA sequence.