MR.HARIKIRI-INSIGHTS

タグ: flow-mab

[Bio-Equipment] 遺伝子導入装置 ; Transfection for Plasmid to cells

Post Views: 265

遺伝子導入装置

バイオ医薬品の目的タンパク質をコードする遺伝子を産生細胞株に注入する装置。その操作の後、導入できた細胞のセレクション → クローニングへと進む。

MaxCyte ExPERT™ 遺伝子導入装置 (MaxCyte)
https://kiko-tech.co.jp/products/maxcyte-expert-transfection-system/

MaxCyte
https://www.maxcyte.com

関連記事

BIOLOGICS
[Bio-Equipment] 遺伝子導入装置 ; Transfection for Plasmid to cells

2020年9月30日

Post Views: 265 遺伝子導入装置バイオ医薬品の目的タンパク質をコードする遺伝子を産生細胞株に注入する装置。その操作の後、導入できた細胞のセレクション → クローニングへと進む。 MaxCyte ExPER…

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Equip] Cytiva – AKTA Ready System

2020年9月30日

Post Views: 283 AKTA Ready System Flow Kitというシングルユースの配管キットを装置する方式のクロマト装置である。配管の洗浄が必要なく、バイオロジクスのCMOでは汎用されている。ク…

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Process] 除菌ろ過 (Sterile filtration) [2020/02/01]

2020年2月1日

Post Views: 183 処理目的得られたサンプルは、in vitro, in vivo試験で評価するために、除菌ろ過を行い、無菌状態にする考慮事項膜面積サンプルの状態 (プレフィルターの必要性) 処理時の…

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Process] UF/DF Process [2020/09/30]

2020年2月1日

Post Views: 181 UF/DF工程目的物資の安定な電気伝導度とpHに組成を変更することを目的とします。ラボシステムとして、Sartorius StedimのVIVA FLOW 200を以下に示します。 F…

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Process] Polishing Process of mAb purification [2020/02/01]

2020年2月1日

Post Views: 192 Polishing (高度精製) 目的一般的な高度精製は、陰イオンと陽イオン交換クロマトグラフィで行われるそれでも十分な精製度が得られない場合、疏水やマルチモーダルの担体が用いられる …

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Process] Low pH Virus Inactivation

2020年2月1日

Post Views: 185 Bio-Process Low pH Virus Inactivation Process 低pH処理によるウイルス不活化は、pHの調整後は静的な保管条件が維持されるため、基本的にはプロセ…

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Process] ハーベスト工程・培養上清の回収 [2020/02/01]

2020年2月1日

Post Views: 371 ハーベスト規定の期間の培養が終了した細胞培養液は、細胞を取り除き培養上清を取得する。この工程をHarvestと呼美ます。図1に示すミリポアのPODファイターはカセット式になっていて、図…

Read more

2020年9月30日
[Bio-Equip] Cytiva – AKTA Ready System
Post Views: 283

AKTA Ready System

Flow Kitというシングルユースの配管キットを装置する方式のクロマト装置である。配管の洗浄が必要なく、バイオロジクスのCMOでは汎用されている。
- クロマトプログラム
- ピンチバルブ
- ローラーポンプ
- シングルユースUV
- スキッド
図1. AKTA Ready System & ReadToProcess Column

https://www.cytivalifesciences.co.jp/catalog/pdf/AKTAready_Datafile.pdf
2020年9月30日
[Bio-Process] 除菌ろ過 (Sterile filtration) [2020/02/01]
Post Views: 183

処理目的

得られたサンプルは、in vitro, in vivo試験で評価するために、除菌ろ過を行い、無菌状態にする

考慮事項
- 膜面積
- サンプルの状態 (プレフィルターの必要性)
- 処理時の温度(室温/冷温室)
- 一般的に膜面積当たりの最適な流速が存在する。勢いよく一気にろ過するような速で行うと、目詰まりが早くなる。
マイレクス（Millex）-HV フィルター, 0.45 µm, PVDF, 33 mm, ガンマ線滅菌済本製品は医療機器あるいは体外診断用医薬品ではありません。
https://www.merckmillipore.com/JP/ja/product/Millex-HV-Syringe-Filter-Unit-0.45m-PVDF-33mm-gamma-sterilized,MM_NF-SLHV033RS

関連記事

BIOLOGICS
[Bio-Equipment] 遺伝子導入装置 ; Transfection for Plasmid to cells

2020年9月30日

Post Views: 265 遺伝子導入装置バイオ医薬品の目的タンパク質をコードする遺伝子を産生細胞株に注入する装置。その操作の後、導入できた細胞のセレクション → クローニングへと進む。 MaxCyte ExPER…

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Equip] Cytiva – AKTA Ready System

2020年9月30日

Post Views: 283 AKTA Ready System Flow Kitというシングルユースの配管キットを装置する方式のクロマト装置である。配管の洗浄が必要なく、バイオロジクスのCMOでは汎用されている。ク…

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Process] 除菌ろ過 (Sterile filtration) [2020/02/01]

2020年2月1日

Post Views: 183 処理目的得られたサンプルは、in vitro, in vivo試験で評価するために、除菌ろ過を行い、無菌状態にする考慮事項膜面積サンプルの状態 (プレフィルターの必要性) 処理時の…

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Process] UF/DF Process [2020/09/30]

2020年2月1日

Post Views: 181 UF/DF工程目的物資の安定な電気伝導度とpHに組成を変更することを目的とします。ラボシステムとして、Sartorius StedimのVIVA FLOW 200を以下に示します。 F…

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Process] Polishing Process of mAb purification [2020/02/01]

2020年2月1日

Post Views: 192 Polishing (高度精製) 目的一般的な高度精製は、陰イオンと陽イオン交換クロマトグラフィで行われるそれでも十分な精製度が得られない場合、疏水やマルチモーダルの担体が用いられる …

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Process] Low pH Virus Inactivation

2020年2月1日

Post Views: 185 Bio-Process Low pH Virus Inactivation Process 低pH処理によるウイルス不活化は、pHの調整後は静的な保管条件が維持されるため、基本的にはプロセ…

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Process] ハーベスト工程・培養上清の回収 [2020/02/01]

2020年2月1日

Post Views: 371 ハーベスト規定の期間の培養が終了した細胞培養液は、細胞を取り除き培養上清を取得する。この工程をHarvestと呼美ます。図1に示すミリポアのPODファイターはカセット式になっていて、図…

Read more
2020年2月1日
[Bio-Process] UF/DF Process [2020/09/30]
Post Views: 181

UF/DF工程

目的物資の安定な電気伝導度とpHに組成を変更することを目的とします。
- 膜面積
- 処理時間
- 室温と冷温室
- TMPの設定 (システムへの入りの圧力と出の圧力管理)
- クロスフロー(ポンプ速度)は、高濃度あるいは高粘度の処理には、適切な設定が必要となる
- バッファ交換: 通常は8 diavolumeで1000倍希釈を目指す
ラボシステムとして、Sartorius StedimのVIVA FLOW 200を以下に示します。

Sartorius, VivaFlow 200

Fisher Scientific –
https://www.fishersci.fi/fi/en/catalog/search/products?keyword=Sartorius+VivaFlow+200

関連記事

BIOLOGICS
[Bio-Equipment] 遺伝子導入装置 ; Transfection for Plasmid to cells

2020年9月30日

Post Views: 265 遺伝子導入装置バイオ医薬品の目的タンパク質をコードする遺伝子を産生細胞株に注入する装置。その操作の後、導入できた細胞のセレクション → クローニングへと進む。 MaxCyte ExPER…

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Equip] Cytiva – AKTA Ready System

2020年9月30日

Post Views: 283 AKTA Ready System Flow Kitというシングルユースの配管キットを装置する方式のクロマト装置である。配管の洗浄が必要なく、バイオロジクスのCMOでは汎用されている。ク…

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Process] 除菌ろ過 (Sterile filtration) [2020/02/01]

2020年2月1日

Post Views: 183 処理目的得られたサンプルは、in vitro, in vivo試験で評価するために、除菌ろ過を行い、無菌状態にする考慮事項膜面積サンプルの状態 (プレフィルターの必要性) 処理時の…

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Process] UF/DF Process [2020/09/30]

2020年2月1日

Post Views: 181 UF/DF工程目的物資の安定な電気伝導度とpHに組成を変更することを目的とします。ラボシステムとして、Sartorius StedimのVIVA FLOW 200を以下に示します。 F…

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Process] Polishing Process of mAb purification [2020/02/01]

2020年2月1日

Post Views: 192 Polishing (高度精製) 目的一般的な高度精製は、陰イオンと陽イオン交換クロマトグラフィで行われるそれでも十分な精製度が得られない場合、疏水やマルチモーダルの担体が用いられる …

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Process] Low pH Virus Inactivation

2020年2月1日

Post Views: 185 Bio-Process Low pH Virus Inactivation Process 低pH処理によるウイルス不活化は、pHの調整後は静的な保管条件が維持されるため、基本的にはプロセ…

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Process] ハーベスト工程・培養上清の回収 [2020/02/01]

2020年2月1日

Post Views: 371 ハーベスト規定の期間の培養が終了した細胞培養液は、細胞を取り除き培養上清を取得する。この工程をHarvestと呼美ます。図1に示すミリポアのPODファイターはカセット式になっていて、図…

Read more
2020年2月1日
[Bio-Process] Polishing Process of mAb purification [2020/02/01]
Post Views: 192

Polishing (高度精製)

目的
- 一般的な高度精製は、陰イオンと陽イオン交換クロマトグラフィで行われる
- それでも十分な精製度が得られない場合、疏水やマルチモーダルの担体が用いられる
- 基本的なレジンとその条件設定が確定できれば、レジンの粒径を小さくすることで、ピークの分離は向上する
考慮事項
- 抗体の場合は、プラットフォーム精製が存在する
  1. Protein A (Binding/Elution)
  2. AEX (Flow-through )
  3. CEX (Binding/Elution)
  4. Virus Filtration
  5. UF/DF (バッファ交換/濃縮)
  6. 添加剤添加
  7. 分注保管
- 研究初期段階で、抗体以外のレアなタンパク質の精製の場合
  - AECまたはCEXでCapturing工程として精製する
  - その場合、バッファ交換が必要ない条件設定を構築した方が良い。以後の追加精製が楽になる
    Conductivityは、容易に低くすることができないため、低いconductivityで回収できれば、続く精製工程の手間が省略できる
    後のpH調整で簡単に調整可能であり、pH調整によるconductivityの変化は少ないため、pHは問わない。
    リン酸を含まないバッファで回収できれば、Polishingに使用するハイドロキシアパタイトでの精製に使える
  - Polishingのクロマトは、ハイドロキシアパタイトが推奨できる。
    pHは5.5以上(でないと、レジンが溶ける)
    アルカリ側は、Resinは安定
    リン酸を含まない、あるいは、低い(~5mM)でないと吸着できないタンパク質もある。前工程で緩衝液の組成は、この工程に備えて考慮しておく
    NaCl濃度で溶出されるタンパク質やリン酸で溶出されるタンパク質など、マルチモーダルな条件設定が可能
    Endotoxinは、分子が色々あるため、パス画分にも、溶出画分にも現れる
    精製戦略としては、パス画分に目的タンパク質をパスさせないこと、目的タンパク質が溶出する直前の洗浄条件を求めること、目的タンパク質が溶出できる最小条件を求めること、である。
GE Healthcare HiPrep™ IEX FF 16/10 Columns, Fisher Scientific –
https://www.fishersci.fi/shop/products/ge-healthcare-hiprep-iex-ff-16-10-columns-2/10607855

関連記事(タンパク質質精製)

BIOLOGICS
[Bio-Equipment] 遺伝子導入装置 ; Transfection for Plasmid to cells

2020年9月30日

Post Views: 265 遺伝子導入装置バイオ医薬品の目的タンパク質をコードする遺伝子を産生細胞株に注入する装置。その操作の後、導入できた細胞のセレクション → クローニングへと進む。 MaxCyte ExPER…

BIOLOGICS
[Bio-Equip] Cytiva – AKTA Ready System

2020年9月30日

Post Views: 283 AKTA Ready System Flow Kitというシングルユースの配管キットを装置する方式のクロマト装置である。配管の洗浄が必要なく、バイオロジクスのCMOでは汎用されている。ク…

BIOLOGICS
[Bio-Process] 除菌ろ過 (Sterile filtration) [2020/02/01]

2020年2月1日

Post Views: 183 処理目的得られたサンプルは、in vitro, in vivo試験で評価するために、除菌ろ過を行い、無菌状態にする考慮事項膜面積サンプルの状態 (プレフィルターの必要性) 処理時の…

BIOLOGICS
[Bio-Process] UF/DF Process [2020/09/30]

2020年2月1日

Post Views: 181 UF/DF工程目的物資の安定な電気伝導度とpHに組成を変更することを目的とします。ラボシステムとして、Sartorius StedimのVIVA FLOW 200を以下に示します。 F…

BIOLOGICS
[Bio-Process] Polishing Process of mAb purification [2020/02/01]

2020年2月1日

Post Views: 192 Polishing (高度精製) 目的一般的な高度精製は、陰イオンと陽イオン交換クロマトグラフィで行われるそれでも十分な精製度が得られない場合、疏水やマルチモーダルの担体が用いられる …

BIOLOGICS
[Bio-Process] Low pH Virus Inactivation

2020年2月1日

Post Views: 185 Bio-Process Low pH Virus Inactivation Process 低pH処理によるウイルス不活化は、pHの調整後は静的な保管条件が維持されるため、基本的にはプロセ…

Page: 1 2 Next »

ランダム表示(Bio)

BIOLOGICS
[rAAV] rAAVの従来からの精製方法 (PEG沈殿、超遠心), 2010 – ID2417 [2019/09/26]

2019年9月26日

Post Views: 330 rAAV vectorの精製方法沈澱化と遠心分離、および超遠心機を使用する従来からのAAV精製方法を以下に2種類を示しました。工業化するには、超遠心機の使用は不適切です。何か代替できる方…

BIOLOGICS
[Vc] Moderna – COVID-19 ワクチン臨床(Phase 3の中間結果は94.5%の有効性を示した – ID19527 [2020/11/16]

2020年7月24日

Moderna社は、新型コロナウイルスのmRNAワクチンを開発している。臨床は、Phase 3を進めており、中間結果では、94.5%の有効性を示した。

BIOLOGICS
[気になる企業] シオノギ製薬 /国内初の新型コロナ治療薬 [2020/12/17]

2020年12月17日

Post Views: 284 塩野義製薬話題エンシトレルビル : ゾコーバ(R)錠125mg (KEGG) 編集履歴 2020/12/17, Mr. Harikiri 2023/10/17, 期日順記載へ変更及び追…

BIOLOGICS
CTD – 製剤安定性 2.3.P.8 [2024/05/22]

2024年5月22日

Post Views: 56 製剤の安定性は，2.3.P.8に記載します．後発医薬品に係るCTD 第２部 (モジュール2) 記載事例　(モックアップ) https://www.iga.gr.jp/assets/pdf/…

BIOLOGICS, medicine
[抗体医薬] アルツハイマー病治療薬: Biogen & エーザイ共同開発 ADUHELM はアメリカでは条件付き承認，エーザイ& BioArctic AB共同開発のlecanemabは日本で承認取得[2023/10/11]

2021年6月8日

Post Views: 266 アデュカヌマブ痴呆症の内の60%は、アミロイドβが蓄積して脳の神経細胞を壊すアルツハイマー病 (AD) と言われいます。このアミロイドβ(Aβ)を取り除くことで、進行を遅らせることができ…

BIOLOGICS
[Bio-Edu] ラクダが持っている抗体は、一般的なIgGとは異なる構造の重鎖抗体 – ID2300 [2019/09/21]

2019年9月21日

Post Views: 345 ラクダの重鎖抗体一般的にラクダ抗体は、通常の抗体IgGとは異なる構造の重鎖抗体と呼ばれる少し分子量が小さい抗体をある比率で持っている。特にラクダ科のアルパカでは抗体の内50%は、この重…

Page: 1 2 … 88 Next »
2020年2月1日
[Bio-Process] Low pH Virus Inactivation
Post Views: 185

Bio-Process

Low pH Virus Inactivation Process

低pH処理によるウイルス不活化は、pHの調整後は静的な保管条件が維持されるため、基本的にはプロセス容器中で実施される。CMOなどのスケールが小さい製造では、シングルユース製品であるFlex bugなどが使用できる。
- Low pH3~4 as Virus Inactivation Process
- 容易に破れず、使用しているプラスチックからの溶出物も少ないバイオ医薬品製造用バッグは、様々な工程で使用されている。
- 抗体医薬製造においても、Low pH処理によるウイルス不活化処理工程の容器として使用されている。
Thermo Scientific™ Productainer™ BPC Bag with 3 Ports
https://www.fishersci.com/shop/products/productainer-bpc-bag-3-ports/p-4521461

関連記事

BIOLOGICS
[Bio-Equipment] 遺伝子導入装置 ; Transfection for Plasmid to cells

2020年9月30日

Post Views: 265 遺伝子導入装置バイオ医薬品の目的タンパク質をコードする遺伝子を産生細胞株に注入する装置。その操作の後、導入できた細胞のセレクション → クローニングへと進む。 MaxCyte ExPER…

BIOLOGICS
[Bio-Equip] Cytiva – AKTA Ready System

2020年9月30日

Post Views: 283 AKTA Ready System Flow Kitというシングルユースの配管キットを装置する方式のクロマト装置である。配管の洗浄が必要なく、バイオロジクスのCMOでは汎用されている。ク…

BIOLOGICS
[Bio-Process] 除菌ろ過 (Sterile filtration) [2020/02/01]

2020年2月1日

Post Views: 183 処理目的得られたサンプルは、in vitro, in vivo試験で評価するために、除菌ろ過を行い、無菌状態にする考慮事項膜面積サンプルの状態 (プレフィルターの必要性) 処理時の…

BIOLOGICS
[Bio-Process] UF/DF Process [2020/09/30]

2020年2月1日

Post Views: 181 UF/DF工程目的物資の安定な電気伝導度とpHに組成を変更することを目的とします。ラボシステムとして、Sartorius StedimのVIVA FLOW 200を以下に示します。 F…

BIOLOGICS
[Bio-Process] Polishing Process of mAb purification [2020/02/01]

2020年2月1日

Post Views: 192 Polishing (高度精製) 目的一般的な高度精製は、陰イオンと陽イオン交換クロマトグラフィで行われるそれでも十分な精製度が得られない場合、疏水やマルチモーダルの担体が用いられる …

BIOLOGICS
[Bio-Process] Low pH Virus Inactivation

2020年2月1日

Post Views: 185 Bio-Process Low pH Virus Inactivation Process 低pH処理によるウイルス不活化は、pHの調整後は静的な保管条件が維持されるため、基本的にはプロセ…

BIOLOGICS
[Bio-Process] ハーベスト工程・培養上清の回収 [2020/02/01]

2020年2月1日

Post Views: 371 ハーベスト規定の期間の培養が終了した細胞培養液は、細胞を取り除き培養上清を取得する。この工程をHarvestと呼美ます。図1に示すミリポアのPODファイターはカセット式になっていて、図…

編集履歴

2020/02/01, Mr. Harikiri
2020/04/24, 追記　(関連記事)
2021/10/30, 文言整備
2020年2月1日
[Bio-Process] ハーベスト工程・培養上清の回収 [2020/02/01]
Post Views: 371

ハーベスト

規定の期間の培養が終了した細胞培養液は、細胞を取り除き培養上清を取得する。この工程をHarvestと呼美ます。

図1に示すミリポアのPODファイターはカセット式になっていて、図2に示すフォルダーにセットします。

PODのフィルターサイズは、デブリス除去、細胞除去、清澄化を段階的に行えるように、大きいサイズから小さいサイズにセットされています。図2に示したフォルダーの大きさは、身の丈ほどあり、1000L~2000Lの培養液を処理するのに必要です。

1. membrane pod

2. Millipore Millistack+ POD

Merck Millipore, Pod Filter
http://www.merckmillipore.com/JP/ja/product/Millistak+-Pod-Disposable-Depth-Filter-Systems,MM_NF-C9485?ReferrerURL=https%3A%2F%2Fwww.google.com%2F&bd=1

ろ過膜の特徴
- Harvest工程は以下のろ過膜を使用可能
  - フィルターサイズで濾過する単純なろ過
  - 「活性炭や鉱物を練り込んだ膜」によるろ過
- 単純なろ過では、精製効果は期待できないが、「活性炭や鉱物を練り込んだ膜」では、培養過程で生じる死細胞由来のタンパク質、DNAなどの不純物を除去することが可能である。
- 「活性炭や鉱物を練り込んだ膜」は、Protein Aレジンのライフタイムを延長効果が期待できるとともに、Protein A施処理後に得られる部分生成品の品質向上も期待できる。
編集履歴
```
2020/02/01 HARIKIRI(MR)
2021/03/27 記載整備
2021/10/30 記載整備
```
関連記事

BIOLOGICS
[Bio-Equipment] 遺伝子導入装置 ; Transfection for Plasmid to cells

2020年9月30日

Post Views: 265 遺伝子導入装置バイオ医薬品の目的タンパク質をコードする遺伝子を産生細胞株に注入する装置。その操作の後、導入できた細胞のセレクション → クローニングへと進む。 MaxCyte ExPER…

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Equip] Cytiva – AKTA Ready System

2020年9月30日

Post Views: 283 AKTA Ready System Flow Kitというシングルユースの配管キットを装置する方式のクロマト装置である。配管の洗浄が必要なく、バイオロジクスのCMOでは汎用されている。ク…

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Process] 除菌ろ過 (Sterile filtration) [2020/02/01]

2020年2月1日

Post Views: 183 処理目的得られたサンプルは、in vitro, in vivo試験で評価するために、除菌ろ過を行い、無菌状態にする考慮事項膜面積サンプルの状態 (プレフィルターの必要性) 処理時の…

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Process] UF/DF Process [2020/09/30]

2020年2月1日

Post Views: 181 UF/DF工程目的物資の安定な電気伝導度とpHに組成を変更することを目的とします。ラボシステムとして、Sartorius StedimのVIVA FLOW 200を以下に示します。 F…

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Process] Polishing Process of mAb purification [2020/02/01]

2020年2月1日

Post Views: 192 Polishing (高度精製) 目的一般的な高度精製は、陰イオンと陽イオン交換クロマトグラフィで行われるそれでも十分な精製度が得られない場合、疏水やマルチモーダルの担体が用いられる …

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Process] Low pH Virus Inactivation

2020年2月1日

Post Views: 185 Bio-Process Low pH Virus Inactivation Process 低pH処理によるウイルス不活化は、pHの調整後は静的な保管条件が維持されるため、基本的にはプロセ…

Read more

BIOLOGICS
[Bio-Process] ハーベスト工程・培養上清の回収 [2020/02/01]

2020年2月1日

Post Views: 371 ハーベスト規定の期間の培養が終了した細胞培養液は、細胞を取り除き培養上清を取得する。この工程をHarvestと呼美ます。図1に示すミリポアのPODファイターはカセット式になっていて、図…

Read more
2020年2月1日