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    [用語] pI ; ピーアイ ; isoelectric point – タンパク質の物理化学性質としての荷電に関する情報

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  • [ICT] Cisco WebEx – テレワークやオンライン授業 – ID13870 [2020/04/20]

    [ICT] Cisco WebEx – テレワークやオンライン授業 – ID13870 [2020/04/20]

    WebEx

    合う、会話する、共同作業する。

    テレワークが叫ばれる中、企業に入り込んでいるMicrosoftではない、テレワークの選択肢の一つが、Cisco Webexです。

    教育期間、医療業界での活用も広がっているようです。

    導入実績では、アメリカの格付け会社 Fortune 100の93%が、コラボレーションにCisco WeBex製品を使用している 参考

    オンライン授業

    教師/講師によるオンライン授業を支援するコンテンツ、学生と保護者のためのガイド、迅速な計画、展開、導入のための IT 部門向けヘルプなどを提供しています。

    https://www.webex.com/ja/webexremoteedu.html
    • オンライン授業計画
    • オンラインでグループプロジェクトによる授業の実施
    • 学生は、どこからでもネット環境があれば授業に参加できる
    • 「子供の教育の継続」のための保護者用ガイドを整備
    • ラーニング管理システム(LMS)との連携

    テレワーク

    COVID-19により世界中のテレワーク需要が増加しています。

    製品と事例
    • Webex Meetings : ビデオ会議
    • Webex Teams : ホワイトボード機能、ファイル共有
    • Webex Calling : 通話
    • Webex Devices : ビデオデバイス
    • 他製品との連携 : Office 365, Google Drive, Gmail, GitHubなど

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    編集履歴
    2020/04/20 はりきり(Mr)
  • [アニメ]「ビィンランド・サガ」を題材にして – ユトランド/デンマーク/バイキングを知る – ID13609 [2020/04/16]

    [アニメ]「ビィンランド・サガ」を題材にして – ユトランド/デンマーク/バイキングを知る – ID13609 [2020/04/16]

    バイキングについて、アニメで学ぶ

    アニメ「ヴィンランド・サガ」は、HNKで放送されたらしいですが、僕は、Amazon Prime Videoで視聴しました。

    「ビィンランド・サガ」では、1000年頃が時代設定です。場所は、イギリス(アングランド、イングランドおよびウェールズ)、グリーンランド、デンマークです。

    ヴィンランド

    ヴィンランドは、アメリカ大陸のようです。「ビィンランド・サガ」では、見果てぬ肥沃な土地「ヴィンランド」として設定されています。本当に、ビンランドがあるのか、アニメ中の地図から特定してみました。バイキングから逃れた者たちは、アイスランドに至りますが、肥沃な土地を夢みます。下図は、別の記事(DDNSに関する)に使用した図ですが、ヴィンランドは、トロントの近くです。

    中々、貧しい時代だったことが伺えます。そうした時代背景から、「バイキング」は現れてきたのでしょう。

    2016年に、イギリスの大英博物館に行ったことがあります。展示の中には、「バイキング」ゆかりの品がありました。イングランドは、「バイキング」から征服された国です。奴隷制はバイキングが作った制度です。

    イギリスは、肥沃な土地であったため、バイキングが攻めてくる以前にも、ローマ人からも攻められています。

    ローマの場合は、厳しい扱いはされず、文明の利器を与えられたとのことでした。イギリスのスカボロー (Scarborough, ヨークシャー)には、ローマ軍が築いたスカボロー城があります。

    勉強になりました。

    遥かなる わがヨークシャー (Faraway My Yorkshire) – より
    81 スカーバラ城

    http://www.shigeru1985yorkshire.com/sec81-scarborough-castle.html

    外務省
    デンマーク王国 Kingdom of Denmark
    ドイツの北にある半島のユトランドと西にある島々を含含む

    https://www.mofa.go.jp/mofaj/area/denmark/index.html

    ビィンランド・サガ

    登場人物名と歴史上の人物名

    ネタバレがあるので、名前はともかく、内容は読み飛ばしてください。

    ラグナル・ロズブローグ (Ragnar Lothbrok)。9世紀にフラスン、イギリスに災いをもたらしたとされる古代スカンジナビアの伝説的な指導者で王(古ノルド語誌: 文字での伝承ではないので、正しく伝わっているのか不明のようだ)。ビョルンの父。「ビィンランド・サガ」では、クヌート王子の側使い(そばづかい)。

    アシュラッド : 「ビィンランド・サガ」では、バイキングの血統を引くが、素性を隠してバイキングをしている。ビョルンとは永遠の友。ラスト間近で、男の血統で瀕死のビョルンと戦い殺す。

    スヴェン王 : 1世(960-1014)、1013にイングランドを征服。「ビィンランド・サガ」では、クヌート王子の父。

    クヌート : 「ビィンランド・サガ」では、スヴェン王の息子。

    トルケル : 「ビィンランド・サガ」では、豪傑(ごうけつ)で100人力

    トールズ : 「ビィンランド・サガ」では、トルフィンの父。トルフィンの目の前で、アシュラッドに殺される。トールズトルケルは、義理の兄弟。トルケルの妹を嫁にした。

    • バイキング Viking :ノルマン二(ノルマン人 : 北の人)の小国は、次第に3国である、スウェーデン (デンマークから北海を越えた真北に位置する)、デンマーク、ノルウェー (スカンジナビア半島の西に位置するノルウェーの東に位置する)に収斂した。略奪を行う者たちは、バイキングと呼ばれた。

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  • 今日の英語 – コロナで自宅待機の相手にいうことば – hope you stay safe and well

    今日の英語 – コロナで自宅待機の相手にいうことば – hope you stay safe and well

    ありがとうと共に気遣うことば —以下のように、簡単な単語で伝わります。

    Thank you and hope you stay safe and well.
    ありがとう、そして、安全にうまくやってくださいね。

    I hope you are keeping well.

    編集履歴
    2020/04/15 Mr.HARIKIRI
  • [rAAV] 特許 0010468  – rAAV vector精製 – アパタイト・クロマト精製法 (レジメ)- ID13457

    [rAAV] 特許 0010468 – rAAV vector精製 – アパタイト・クロマト精製法 (レジメ)- ID13457

    METHODS FOR PURIFICATION OF RECOMBINANT AAV VECTORS United States Patent Application 20190010468 Kind Code:A1

    http://www.freepatentsonline.com/y2019/0010468.html

    概要

    • PEG添加でCHT (and CHF)のDBCを100倍の増強
    • All rAAV

    Claim

    1. A method for isolating a population of recombinant adeno-associated virus (rAAV) particles from in-process impurities in a feedstream, comprising the steps of:(a) contacting a feedstream containing the rAAV particles with an apatite chromatography medium in the presence of polyethylene glycol (PEG), wherein the rAAV particles bind to the apatite chromatography medium; and(b) eluting the rAAV particles bound to the apatite chromatography medium with an elution buffer containing less than 3% (w/v) PEG.

    2. The method of claim 1 , wherein the apatite chromatography medium is ceramic hydroxy apatite (CHT).

    3. The method of claim 1, wherein the apatite chromatography medium is ceramic fluoroapatite (CFT).

    4. The method of claim 1, wherein the specific binding of the apatite chroma attooggrraapphhyy mmeeddiiuumm ttoo tthhee xrAAAV particles is between 1014 and 1016 DNase-resistant particles per milliliter (DRP/mL).

    5. The method of claim 1 , further comprising a step of binding the rAAV particles in the feedstream eluted from the apatite chromatography medium to an anionic chromatography medium.

    6. The method of claim 1 , wherein the feedstream containing the rAAV particles in step (a) is contacted with an apatite chromatography medium in the presence of polyethylene glycol (PEG) and a basic buffer.

    7. The method of claim 6, wherein the basic buffer is between pH 7.6 and 10.

    8. The method of claim 6, wherein the basic buffer is between pH 8.0 and 10.0. 

    9. The method of claim 6, wherein the basic buffer is between pH 9.0 and 10.0.

    10. The method of claim 6, wherein the basic buffer comprises borate.

    11. The method of claim 1, wherein the PEG has an average molecular weight between about 5,000 (PEG5000) grams per mole and about 15,000 (PEG15000) grams per mole.

    12. The method of claim 11 , wherein the PEG has an average molecular weight of about 6,000 (PEG6000) grams per mole.

    13. The method of claim 1, wherein the feeds tream containing the rAAV particles in step (a) is contacted with the apatite chromatography medium in the presence of between about 3% (w/v) and about 10% (w/v) PEG.

    Claims

    1. A method for isolating a population of recombinant adeno-associated virus (rAAV) particles from in-process impurities in a feedstream, comprising the steps of: (a) (i) contacting a feedstream containing the rAAV particles with an apatite chromatography medium in the presence of polyethylene glycol (PEG), wherein the rAAV particles bind to the apatite chromatography medium; and (ii) eluting the rAAV particles bound to the apatite chromatography medium with an elution buffer containing less than 3% (w/v) PEG; and (b) (i) contacting the feedstream eluted from the apatite chromatography medium containing the rAAV particles with a hydrophobic interaction chromatography (HIC) medium in a high salt buffer comprising citrate, wherein the rAAV particles and the in-process impurities bind to the HIC medium; and (ii) eluting the rAAV particles bound to the HIC medium with a medium salt buffer.  

    2. The method of claim 1, wherein the apatite chromatography medium is ceramic hydroxyapatite (CHT) or ceramic fluoroapatite.  

    3. 35. (canceled)  

    6. The method of claim 1, wherein the feedstream containing the rAAV particles in step (a)(i) is contacted with an apatite chromatography medium in the presence of polyethylene glycol (PEG) and a basic buffer.  

    7. (canceled)  

    8. The method of claim 6, wherein the basic buffer is between pH 8.0 and 10.0.  

    9. (canceled)  

    10. The method of claim 6, wherein the basic buffer comprises borate.  

    11. The method of claim 1, wherein the PEG has an average molecular weight between about 5,000 (PEG5000) grams per mole and about 15,000 (PEG15000) grams per mole.  

    12. (canceled) 

    TABLE 2. Screening of resins for binding of rAAV-1 compared to binding of process contaminants

    ResinResin TyperAAV-1Helper VirusHost Cell DNASerum AlbuminSerum Proteins
    UnoS pH 5.5Cation Exchange+0++
    UnoS pH 7.0Cation Exchange
    UnoQ pH 8.5Anion Exchange+++++++++++
    UnoQ pH 7.0Anion Exchange++++++++++++
    Fractogel EMD SO3Cation Exchange+++00
    CHTApatite+0++++
    CFTApatite+0++++
    HIC PhenylHydrophobic Exchange00
    HIC ButylHydrophobic Exchange+++00
    HIC HexylHydrophobic Exchange+++00
    HIC PPGHydrophobic Exchange00
    Source SIon Exchange+00++0
    Source QIon Exchange+00++0
    TMAEIon Exchange+00++0
    IMAC FeCl300++
    Superdex 200Gel Filtrationvoidvoidchasechasechase
    HW55Gel Filtrationvoidvoidchasechasechase
    HW65Gel Filtrationvoidvoidchasechasechase
    HW75Gel Filtrationvoidvoidchasechasechase
    Key: (−) = present in flow-through (no binding); + = weakly bound (eluted very early in the gradient); ++ to ++++ = stronger binding (eluted further along the gradient).

    TABLE 3. Relative strength of binding of rAAV-1 and BSA to apatite resin at pH = 6.5 or pH = 9.0, with or without 5% (w/v) PEG6000

    Binding conditionsBSA5% (w/v) PEG6000
    pH = 6.50+++
    pH = 6.50 + 5% (w/v) PEG6000++++++
    pH = 9.0++
    pH = 9.00 + 5% (w/v) PEG6000+++++
    Key: + = weak binding;, ++ = medium binding; ++++ = strong 

    TABLE4. Glucan clearance in the process

    Processing stepGlucan concentration (ng/mL)Total amount per lot (ng) (250 L scale)
    Clarification10.42,600,000
    TFF1361,541,016
    CHT elution1.94,769
    Post HIC and SEC0.2662
    Final Anion Exchange Eluate0.171

    TABLE 5. Screening for AAV1 binding in alternative buffers

    Total infectious units of Ad5 in CHT column fractionsFraction
    Load ratio6.6 mL13.5 mL33 mL
    Load9.0 × 1081.3 × 109 9.0 × 108
    Flowthrough + chase<2.5 × 105<3.6 × 105<6.9 × 105
    POWash2.9 × 1062.7 × 106<2.6 × 106
    Washes II & III3.6 × 1062.2 × 106 2.8 × 106
    Elution<6.9 × 104<6.9 × 104<3.5 × 105
    Log reduction value (LRV)>4.1>4.3>3.4

    TABLE 6

    疎水担体として一般的によく使われるButylとPhenylを比較してして、各緩衝液組成の下、パススルーさせた時、そのパススルーの回収率の比較をしている。

    一般論として、バッファ組成から吸着性が良いと考えられる条件は、以下の通りであるが、その一般論とは少し異なっているように思われる

    • 吸着性は、酸性pHで強くなり、アルカリ性pHで低くなる
    • 吸着性は、塩濃度が高い程強くなる。ただし、塩の分子量に依存しており、分子量が大きいほど強くなる
    • この表の結果では、この経験則に反しているように見える。このような場合、以下の考察が必要であると考える
      • 塩の種類による可溶性の向上/不要化の促進があるかも知れない
    • 考えられる考察
      • アルカリ性と酸性では、酸性の方が可溶的である
    Buffer System TestedButyl 650M (% in flow-through)EMD-Phenyl (% in flow-through)
    1.1M Sodium Sulfate (pH = 7)0%0%
    1M Sodium Citrate (pH = 7)0%0%
    1.3M Potassium Phosphate (pH = 7)3%3%
    2.9M NaCl, 50 mM Sodium Citrate (pH = 4)0%28% 
    1M Glycine, 50 mM Sodium Citrate (pH = 4)4%1%
    50 mM Potassium Phosphate (pH =4.5)3%NT
    50 mM Sodium Citrate (pH 4)4%NT
    2.9M NaCl, 50 mM Potassium Phosphate (pH 4.5)17% NT

    TABLE 7. Relative binding of rAAV-1 versus model in-process impurities in different HIC buffers

    表から言えることは、rAAV-1は、AAV血清型1で作ったVector、Ad5は、遺伝子治療用で最も使用されるadenovirus血清型5。疎水担体(HIC)への結合性は、rAAV-1よりもAd5の方が強い。不純物であるDNAの結合性は弱い。

    Buffer SystemrAAV-1Ad5DNA
    0.1M sodium sulfate + bis tris buffer, pH = 7.0+++
    0.8M sodium sulfate, bis tris buffer, pH = 7.0+++0
    1M sodium citrate, pH = 7.0+++0
    2.9M NaCl (50 mM sodium citrate to buffer at pH = 4.0)0
    Key: “0” = no binding material present in flow-through; “−” = very weak binder; “+” = strong binder; “++” = stronger binder.

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    [ホテル] 2020 – ザ リッツ・カールトン京都、The Lobby Loungeに行ってきた – ID13406 [2020/04/13]

    ID13406

    ザ・リッツ・カールトン京都

    外国から京都に来る富裕層をターゲットにしているという、ザ リッツ・カールトン京都; The Ritz-Carlton, Kyotoの「The Lobby Lounge」で軽食をいただいてきました。

    地上4階建て、地下は2階の建物、と見立てました。一見、看板は見当たらず、ホテルには見えません。どこかの豪邸のようでした。

    1Fのロビーから吹き抜けで1B, 2Bと見えますが、いくつか有る部屋の前には、ホテルマンがいて一元さんは寄せ付けない雰囲気だったので、降りて行けませんでした。

    駐車

    • ¥1,200/hr
    • 2時間無料/>¥10,000

    フォト

    導入部

    駐車場から外の通路を渡り,裏玄関から入ると,左にホテルマンがいるので,ロビーラウンジに来たことを伝えて, 右に進むと,大きなドアがあり,行く手を阻む^^)

    ロビー

    The Lobby Lounge

    • Club sandwich French Fried: ¥2,800
    • Tea Master Special Earl Grey: ¥1,500
    • KUROGE WAGYU Beef Burger Potato Chips: ¥3,800
    • Coffee: ¥1,500
    • Service Charge: ¥1,455
    • Subtotal: ¥9,700
    • Payment: ¥12,271
    • Charge Due: ¥0
    • Taxable Total: 10% ¥12,271
    • Tax: 10% ¥1,116
    • Net: 10% ¥11,155

    Phone 075-746-5555

    自動ドアを入ると、琴の生演奏。

    ラウンジ

    食事

    ハンバーガーは、フォークとナイフでゆっくり味わう。クラプサンドは、手でお召し上がりください。

    まとめ

    たてものは,古くても良いものもありますし,新しいほうが良いものもあります.たまには行きたい異空間でした.建物が新しいうちに,いってみてはどうでしょうか.

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    [Trip] カリフォルニア・Napa Valleyを行く – イタリアン・レストラン、Bistro Don Giovanniで昼食 – ID13402 [2020/04/13]

    Napaだ〜

    Napa Valleyはワインで有名だそうです。私はお酒は飲まないので、銘柄や産地についてよくは知りませんでした。食事は、別です。

    Napaのワイナリーにいった帰りに、イタリアン・レストランで遅い昼食(15時)をいただきました。

    レストランだ〜

    田舎の一本道にあるレストラン「Giovanni ジオバーニー」です。年配の方など、何かのパーティで食事にこられているようでした。

    前日に予約していましたが、やはり当日の様子は、満席状態で賑わっていました。

    Giovanniは、道すがらにあります

    訪れたのは昨年10月中旬です。ハロウィーンでお馴染みのカボチャがごろごろ飾られていました。

    Giovanniの店内

    イタリアン・レストランです。

    Giovanniでの食事

    バスタ、ピザ、サラダを注文

    Giovanni Cafe

    日本人にも普通に美味しい料理でした。こうゆうところに来ての最大の醍醐味は、食事の味だけではなく、店内の雰囲気を決めてしまう、来られているお客さんの雰囲気や活気を感じることです。

    僕ももうアラ還ですが、なにやら元気をいただきました。よい旅でした。

    2020/02/22 はりきり(Mr)

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    [Trip] Napa Valleyを行く – Castello di Amorosaは、城造りワイナリー [2020/04/13]

    サンフランシスコだ〜

    San Franciscoから車で北に向かう事、2~3時間。Napa Valleyという地域に入ると葡萄畑が広がる

    途中、車窓を開けるとびっくりする。ぶどうの発酵した匂いがすごい。

    Napaだ〜

    世界が一変した。

    いい匂いだ。

    更に車を進めると「Castello di Amorosa」に到着。

    Napaは盆地になっているようで、訪れた時は霧が発生し、それがミストとなってきもちよく顔を湿らせた。

    NAPA VALLEYのワイナリーの1つCastello di Amorosaは、欧州風の城造りの外観です。内装などは、ヨーロッパから運んできたとのこと。

    予約していたワイナリーのツアー(約7千円)は、10名程度のツアー客に1の女性がが1時間程度で各設備、Fermenter(発酵タンク)などの設備、地下の樽保管庫の説明、ぶどうの試食と樽ワインの試飲をエスコートしてくれる。

    最後に、お土産スペースの横にあるバーにに招かれ、1万円程度までのワインのリストが渡されて、試飲したい6種類のワインをチェックした。順次、軽いワインからついでくれ、試飲をさせてくれる。

    カリフォルニア国際空港方面から北に向かう途中

    いまでも電車が走っている。いまでも、ぶどうの運搬に使用されているらしい。

    ワイナリーだ〜

    アモローザ・ワイナリーの周辺

    アモローザ・ワイナリーの中へ

    アモローザ・ワイナリーの発酵タンク

    アモローザ・ワイナリーの地下へ

    ツアーのチケットは、開始時に破かれる。地下には中世ヨーロッパの甲冑などを所蔵されているて、ワイン樽の保管スペースまで、楽しませてくれます。

    アモローザ・ワイナリーの地下貯蔵庫

    貯蔵中のワインを試飲

    アモローザ・ワイナリーの製品の試飲

    アモローザ・ワイナリーのお土産

    Amorosaの帰りは、帰り道にあるイタリアン・レストランで昼食をいただきました。サンフランシスコからは、一本道でしたが、よい旅でした。

    2020/09/28、悲しいニュースが飛び込んできました。被害に遭われた皆さんにお見舞い申し上げます。

    Castello di Amorosaを含むワイナリーなど、家屋が山火事のせいで火災にあってしまったというのです。ネットニュースでも、Twitterでも見てみました。Castello di Amorosaの城作りの建物内部も燃えたようです。地下の貯蔵所も被害を受けたのかは不明です。15年前にイタリアの城を模して作られたワイナリーでした。コロナ禍、経営状況を心配していたところでしたが、これからの再建に頑張って欲しいと思います。Napa-Valleyはほんとうに良いところです。

    https://sanfrancisco.cbslocal.com/2020/09/28/glass-fire-embers-cross-napa-valley-towards-santa-rosa-destroy-castello-di-amorosa/

    編集履歴
    2020/04/13 Mr.HARIKIRI (2019/10のNapa-Valley)
    2020/09/29 かじについて

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  • [Anime]  Amazon Prime Video – これからも視聴し続ける [2020/04 ~]

    [Anime] Amazon Prime Video – これからも視聴し続ける [2020/04 ~]

    視聴した始めた年(月日)
    「タイトル」(制作年)
    「サムネイル」(Amazon Prime Videoにリンク)、あらすじ、感想など。


    「本好きの下克上」 (2020), 配信が始まった時に1話を見て面白くないとおもった。15話までの配信があった日は、COVID-19で外出を自粛していた土曜日でした。1話を含め一気に観ました。面白かった。概要は、体の弱いマインの周りで優しく物語は進むこと、及びタイトルから想像できす。


    「CONTON」 (2011)
    , 金融街の戦いをデフォルメ・擬人化


    UN-GO(フジテレビオンデマンド) (2011)

    「虚構推理」、「物の怪」、「ID:INVADED イド:インヴェイデッド 」が好みなら、面白く見れるかも。

    UN-GO episode:0 因果論(フジテレビオンデマンド)(2011)


    2020/04
    「Re:ゼロから始める異世界生活」 (2020, 新編集)
    , 7月から始まるシーズン2への布石


    2020/04
    「LISTENERSリスナーズ」 (2020)
    , プレイヤーと耳なし、プレイヤーと少年、おそらく関係性は「エウレカセブン」、キャラクターは「進撃のバハムート」、これからが楽しみ。

    2020/05
    「八男って、 それはないでしょう!」 (2020)
    安心して見れるストーリー


    2020/05
    「プランダラ」 (2020)
    廃棄戦争、アニメーターは新人さん達ですかね。


    2020/05
    「グレイプニル」 (2020)
    アイデアがすごい!


    2020/05
    「乙女ゲームの破滅フラグしかない悪役令嬢に転生してしまった…」 (2020)
    安心して見れる!



    2020/05
    「プリンセス・プリンシパル; Princess Principal」 (2017)
    背景がすばらしい! 背景の事情に衝撃てきでした。

    2020/05
    「乙女ゲームの破滅フラグしかない悪役令嬢に転生してしまった…」 (2020)
    安心して見れる!